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注意缺陷多动障碍(ADHD)是儿童期尤其是学龄期儿童最常见的行为障碍。ADHD的病因是多方面的,包括生理、心理、社会等因素。本实验从神经生化的角度来寻找病因线索,重点研究单胺类神经递质和氨基酸在ADHD发病中的作用。本实验在以下三个方面进行了研究:1)建立多种氨基酸同时测定的方法(包括已有和未见文献报道的可能与ADHD相关的氨基酸;2)建立与ADHD相关的单胺类神经递质及其代谢物的灵敏准确的测定方法;3)研究这些神经递质及氨基酸在ADHD中的改变,探讨ADHD可能的病理生化机制。论文主要工作如下:一、建立柱前衍生化-高效液相色谱法测定氨基酸类神经递质的方法及其评价所研究的几种氨基酸由于不含有芳香环等生色团,无法直接检测,因此选用柱前衍生试剂-丹酰氯,先将氨基酸衍生为具有较强紫外和荧光吸收的衍生物,通过测定其衍生产物的荧光强度对氨基酸进行定量分析。本实验建立了一种同时快速测定谷氨酸、天冬氨酸、γ-氨基丁酸、甘氨酸、牛磺酸5种氨基酸类神经递质的高效液相色谱法。采用KromasilC18 (4.6×250mm,5um)为色谱柱,丹酰氯为柱前衍生试剂,以曲唑酮为内标,0.1mol/L醋酸钠缓冲液:甲醇=58:42,14mmol/L庚烷磺酸钠溶液为流动相,流速为1ml/min,荧光检测器检测,等度洗脱。在1～200mg/L范围内,各组分线性关系良好(r=0.999),每种氨基酸的回收率为80.1%～92.9%。本方法简便、快速、准确,可用于脑组织中氨基酸类神经递质的测定。二、建立高效液相色谱法测定单胺类神经递质的方法及其评价根据实验的需要,分别建立了高效液相色谱-荧光检测法(HPLC-Flu)和丹酰氯柱前衍生化-高效液相色谱法-紫外(Dns-HPLC-UV)测定单胺类神经递质及其代谢物的方法。HPLC-Flu法是以KromasilC18 (4.6×250mm, 5μm)为色谱柱,0.1mol/L的醋酸钠溶液:甲醇(体积比10:90)为流动相,用冰醋酸调pH为5.5,其中含0.2mmol/L乙二胺四乙酸二钠。流速1.5ml/min,进样量20μl,柱温为室温,激发波长286nm,发射波长318nm。各待测物的检出限可达1.0pmol~3.0pmol,相对标准偏差(RSD%)分别为2.3%, 2.6%, 3.1%、2.9%、2.7%、1.4%和2.9%(n=5),在2~300pmol范围内,各组分线性关系良好