初发1型糖尿病患儿外周血单个核细胞FOXP3和CTLA-4表达的研究

来源 :中国医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xiameng
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目的:  研究初发1型糖尿病(type1diabetesmellitus,T1DM)患儿外周血叉状头转录因子(Foxheadtranscriptionfactor3,FOXP3)和细胞毒T淋巴细胞相关抗原-4(cytotoxicT-lymphocyteantigen-4,CTLA-4)表达,及患儿血清可溶性FOXP3和CTLA-4蛋白水平的变化,并观察其在不同1型糖尿病抗体、不同年龄组及T淋巴细胞亚群之间的表达差异,比较其与糖化血红蛋白(HbA1c)及C肽的相关性,探讨它们在1型糖尿病发病中所起的作用。  方法:  糖尿病组:选取初发T1DM患儿50例,男23例,女27例,年龄3-14岁,平均(8.8±2.9)岁;均符合ADA诊断标准,既往健康。对照组:健康儿童30例,男18例,女12例,年龄3-14岁,平均(8.2±2.8)岁,近期无感染史,无糖尿病家族史;均留取空腹静脉血3ml,抗凝,置-70℃保存。糖尿病患儿常规检测1型糖尿病抗体、T淋巴细胞亚群、HbA1c和C肽等项指标。标本解冻后提取mRNA,逆转录获取总cDNA,用real-timePCR法研究FOXP3和CTLA-4mRNA表达;ELISA方法检测血清中可溶性FOXP3和CTLA-4蛋白水平。采用SPSS17.0统计软件对数据进行统计学分析,计量资料用均数±标准差((x)±s)表示,多个样本均数的比较采用单因素方差分析,组间数据两两比较采用LSD-t法,两变量的相关分析采用Pearson相关分析,P<0.05为差异有统计学意义。  结果:  糖尿病患儿FOXP3mRNA表达低于对照组(0.95±0.48vs2.11±0.79,P<0.01);其血清可溶性FOXP3蛋白浓度亦低于对照组(6.27±1.49ng/mlvs9.02±2.37ng/ml,P<0.01);糖尿病患儿CTLA-4mRNA表达高于对照组(2.43±0.83vs1.94±0.84,P<0.01);其血清可溶性CTLA-4蛋白浓度亦高于对照组(77.88±22.34ng/mlvs65.97±12.11ng/ml,P<0.01)。Pearson相关分析显示糖尿病患儿FOXP3和CTLA-4基因与蛋白表达均呈正相关(r=0.758,0.396;P<0.05);且FOXP3与CTLA-4蛋白表达有相关性(r=-0.624;P<0.05);糖尿病患儿FOXP3和CTLA-4mRNA及蛋白表达与HbA1c和C肽均无相关性(P>0.05)。糖尿病患儿不同1型糖尿病抗体、不同年龄组之间外周血中FOXP3和CTLA-4基因及蛋白表达无统计学差异。1型糖尿病抗体阳性组B淋巴细胞所占比例高于抗体阴性组,差异有统计学意义(P<0.05)。  结论:  初发1型糖尿病患儿外周血FOXP3和CTLA-4基因与蛋白表达较对照组发生明显变化,且基因与蛋白表达均有相关性,提示通过调节两者基因及蛋白水平参与1型糖尿病的发病过程;我们的研究数据表明FOXP3与CTLA-4蛋白表达呈负相关,支持CTLA-4控制FOXP3在调节性T细胞(Tregulatorycell,Treg)的表达的观点。本研究未发现这两项指标基因及蛋白表达与C肽和糖化血红蛋白有相关性。实验数据显示1型糖尿病抗体阳性患儿外周血中B淋巴细胞所占百分比高于抗体阴性患儿,提示了体液免疫功能可能参与了T1DM的发生和发展。
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