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本实验室于2000年报道克隆到了1个编码新的人α-甘露糖苷酶MAN2C1的cDNA。本论文工作的目的是用RNAi技术抑制Man2cl基因在肿瘤细胞的表达，研究对肿瘤细胞恶性生物学行为的影响，并探讨其治疗肿瘤的可能性。首先用本实验室已有的逆转录病毒载体pXSN-hU6+27，构建了pXSN-hU6+27-siMan2cl。包装成逆转录病毒后，感染Man2cl基因高表达的人食道癌细胞株EC9706，并作了细胞克隆。用real-time RT-PCR及用本人制备的抗MAN2C1单抗，检测了克隆细胞的Man2cl基因表达，见与感染空载体病毒的细胞相比，克隆细胞的Man2cl基因表达明显抑制。28个Man2cl基因表达抑制的克隆细胞株中有15个在培养中不能存活，剩余的克隆株在培养中生长缓慢。用流式细胞仪对其中2个克隆株细胞作凋亡分析，凋亡率分别为7.30％(克隆1)和17.6％(克隆2)，而野生型细胞和感染空载体病毒的细胞(M细胞)的凋亡率则分别为1.55％和1.44％，表明Man2cl基因表达抑制促进了细胞凋亡。细胞周期分析克隆2细胞的G1期细胞占28.5％，S期细胞占43.9％和G2期细胞占27.6％。而野生型细胞和感染空载体病毒的细胞的G1期细胞比率为59.6％和58.2％，S期细胞为26.2％和27.0％，G2期细胞为14.2％和14.7％。这显示细胞的细胞周期受到了干扰。把细胞接种裸鼠皮下，肿瘤生长曲线显示与野生型细胞和感染空载体病毒的细胞相比，Man2cl基因表达抑制的细胞的成瘤性生长受抑。实验第8周末的肿瘤平均重量为1.52±0.53g(克隆1)、1.47±0.62g(克隆2)、3.033±0.65g(w细胞)和2.74±1.06g(M细胞)。克隆1或克隆2与W细胞或M细胞间的差别有统计学意义(t检验，p＜0.05)。这些数据表明，所设计的siMan2cl能有效抑制Man2cl基因的表达，Man2cl基因表达抑制对食管癌细胞EC9706的恶性生物学行为有明显的抑制作用。蛋白质的N-糖基化与肿瘤的发生发展关系密切，ConA与Man2cl基因表达抑制的EC9706细胞的结合明显低于对照细胞的现象提示，细胞蛋白质N-糖基化的变化可能在EC9706细胞恶性生物学行为减弱中起作用。本论文工作随即用腺病毒载体pDC316-EGFP-U6构建了重组腺病毒质粒，并包装成腺病毒Ad5-siMan2cl。由于检测不到Ad5-siMan2cl感染对EC9706细胞在培养中生长的影响(可能与Ad5-siMan2cl对EC9706细胞的感染率低有关)，我改用人鼻咽癌细胞CNE-2L2做靶细胞，因为Ad5-siMan2cl对CNE-2L2细胞的感染率高，且Ad5-siMan2cl感染对CNE-2L2细胞在培养中的生长有明显的抑制作用。把Ad5-siMan2cl注射入接种野生型CNE-2L2细胞于裸鼠皮下所长的肿瘤，见与注射PBS或Ad5-EGFP相比，肿瘤的生长受抑(P＜0.05)。由于在本实验室以往对Man2cl基因表达抑制的CNE-2L2细胞与野生型CNE-2L2细胞所作的mRNA差异表达分析中，见前者高表达的基因中以BCSC-1表达增强最显著，在前者低表达的基因中以CD44表达减弱最显著，而且本实验室新近的研究确认BCSC-1基因异位表达或用siRNA抑制CD44表达，均使CNE-2L2细胞的恶性生物学行为减弱，故我也研究了腺病毒载体介导的对CNE-2L2细胞所长肿瘤的BCSC-1基因治疗和siCD44治疗。结果表明BCSC-1与siCD44均有治疗作用。以上结果证明，Man2cl有可能成为某些肿瘤治疗的靶基因，BCSC-1和CD44也有可能成为某些肿瘤治疗的靶基因。