【目的】 1．观察二硝基氟苯(DNFB)诱导的变应性接触性皮炎(ACD)小鼠模型的瘙痒反应。 2．探讨P物质(SP)和神经激肽1(NK1)受体在ACD小鼠模型瘙痒发病中的作用。 【方法】 1．DNFB诱导ACD小鼠模型的建立 实验前1天剃除小鼠腹部毛发，面积为1.5 cm×2cm，实验第1、2天在腹部剃毛区外涂0.5％DNFB 25μL致敏。第5天剃除颈背部毛发，面积为1 cm×2 cm，第6天在颈背部剃毛区外涂0.2％DNFB20μL激发。对照组外涂等量溶剂致敏、激发。 2．ACD小鼠搔抓行为的观察 无人、安静的环境中，摄像机拍摄激发前及激发后0～1 h、4～5 h、16～17 h、24～25 h、48～49 h和72～73 h小鼠活动情况。依据录像回放由不知情人员进行搔抓次数的统计。 3．Spantide和纳络酮对ACD小鼠搔抓行为的影响 激发前0.5 h 和激发后23.5 h、47.5 h，皮内注射0.5 nmol NK1 受体拮抗剂 spantide 0.05 ml 或皮下注射阿片受体拮抗剂纳络酮(1 mg/kg)，观察小鼠搔抓次数的变化。对照组注射生理盐水。 4．皮损内SP含量的检测 在激发后48 h处死小鼠，剪下颈背部皮损进行组织匀浆，ELISA法检测匀浆上清液中SP含量。 5．皮损内NK1受体表达的测定 取激发后48 h的颈背部皮损，用10％甲醛溶液固定，石蜡包埋并连续切片，进行免疫组化SP法染色；染色结果用图像分析仪进行半定量分析。 【结果】 1.ACD小鼠搔抓行为的观察 ACD小鼠在激发后73h内6个时段的搔抓次数均明显多于对照组(F=746.33，P<0.01)；在激发后0～1 h和48～49 h出现两次搔抓高峰。对照组小鼠在激发后0～1 h出现1次搔抓高峰，此后逐渐减少。 2.Spantide预处理对ACD小鼠搔抓行为的影响 激发前0.5 h皮内注射spantide对0 h～1 h小鼠的搔抓行为无明显影响(t=1.80，P>0.05)，激发后23.5 h、47.5 h用药可明显抑制24～25 h、48～49 h小鼠搔抓行为(t=10.84，P<0.01；t=13.54，P<0.01)。 3.纳络酮预处理对ACD小鼠搔抓行为的影响 激发前0.5 h皮内注射spantide对0～1 h小鼠的搔抓行为无明显影响(t=1.86，P>0.05)，激发后23.5 h、47.5 h用药可明显抑制24～25 h、48～49 h小鼠搔抓行为(t=4.06，P<0.01；t=17.51，P<0.01)。 4.皮损内SP含量检测 模型组小鼠皮损内SP含量明显低于对照组(t=2.59，P<0.05)。 5.皮损内NK1受体表达 NK1受体免疫反应阳性产物在胞质内呈棕黄色颗粒状沉积，主要分布在表皮角质形成细胞、真皮血管内皮细胞及小汗腺导管细胞。模型组中NK1受体表达明显高于对照组(t=6.79，P<0.05)。 【结论】 1.DNFB诱发的ACD小鼠搔抓行为是瘙痒相关反应。 2.NK1受体拮抗剂预处理抑制了ACD小鼠伴发的瘙痒反应，且搔抓高峰时小鼠皮损内NK1受体表达上调，显示SP通过激活皮肤内NK1受体参与ACD小鼠瘙痒的发生。