在盐渍条件下，碱蓬的根和地上部分在生长、离子积累、质子泵活性、V-H~+-ATPase的表达等几个方面存在明显差异，表明盐胁迫下地上部分和根在耐盐方面的作用和耐盐机理不同，二者共同影响着植物的耐盐性。NaCl和KCl对碱蓬上述各方面的效应也有显著差别。本实验目的是研究NaCl和KCl对碱蓬生长及液泡膜质子泵活性的效应，以盐生植物碱蓬为材料分别用NaCl和KCl处理，测定根和地上部分的有关生理指标，通过蔗糖密度梯度离心提取了碱蓬根和地上部分的液泡膜微囊，测定了V-H~+-ATPase、V-H~+-PPase活性，并进行Western blot分析以确定V-H~+-ATPase各亚基表达情况，主要结果如下： 1 NaCl处理对碱蓬根和地上部分生长和液泡膜质子泵的效应 1．1生长和离子积累 从碱蓬地上部分鲜重和干重变化趋势看，低盐胁迫(200mmol／L)明显促进碱蓬地上部分的生长，高盐胁迫(400mmol／L NaCl)与低盐胁迫相比抑制碱蓬地上部分的生长；在各种浓度的盐胁迫条件下，根的生长受盐胁迫影响小，说明了盐胁迫下地上部分生长变化大，而根在盐胁迫下保持稳定。根的肉质化程度远低于地上部分，但是根在盐处理下肉质化程度也增加。 碱蓬用正常Hoagland培养液培养时有聚Na~+作用，根吸收的大部分Na~+运往地上部分积累起来，可以作为渗透调节剂，增强吸水能力。盐胁迫下，Cl~+-、Na~+主要积累在地上部分，大约有97％的Na~+积累在地上部分，根只占3％，因而地上部分细胞汁液渗透势大大低于根。由于碱蓬的根鲜重占整株鲜重的1╱10左右，而且盐胁迫下无机盐相对含量很低，所以碱蓬的地上部分是积累盐的主要部位，根在抗盐中的作用不在于积累无机盐。在非盐胁迫条件下碱蓬地上部分除了选择K~+作为渗透调节剂以外，Na~+也作为一种重要渗透调节剂，根倾向于选择K~+作为渗透调节剂。 1．2液泡膜质子泵活性与亚基表达 碱蓬根和地上部分V-H~+-ATPase的亚基有差异。从地上部分的V-H~+-ATPase中检测到66kDa、55kDa、36kDa和18kDa等4种亚基；根只显示1种亚基(18kDa)，其余3个亚基与本实验所用抗体无明显反应。可见，根和地上部分V-H~+-ATPase的组成性构成不同，存在异构现象(isoform)，也有可能是有其他三种亚基虽然相同但是蛋白量很少。200mmol／L NaCl胁迫后，地上部分V-H~+-ATPase各亚基的数目及种类没有变化，表达量明显增加，各亚基增加幅度相似。根内V-H~+-ATPase的18 kDa亚基也明显受盐刺激而表达增加，与地上部分不同的是，根的印迹图上出现一个新肽段(16 kDa)，可能是18kDa亚基的降解产物。NaCl胁迫后，地上部分V-H~+-ATPase各亚基表达量明显增加，其水解活性也相应增加，由于没有新亚基的出现而且盐胁迫后亚基表达形式相同，所以V-H~+-ATPase水解活性增加的原因是盐胁迫刺激丁V-H~+-ATPase表达而不是结构改变。根内V-H~+-ATPase 18kDa亚基也受盐刺激而明显增加，和地上部分相比，根V-H~+-ATPase的18kDa亚基更容易受盐胁迫影响而发生降解，因而根内V-H~+-ATPase活性受 NaCI血KCI斟松对仪8住犬及般尬殿瘩子鱼捞注肘级应 到影响，其V－H”－ATPase活性没有象地上部分那样大幅度增加。盐胁迫后，地上部分 V－H”－PPase水解活性略有增加，根中的变化不显著。根中质子泵表达量虽有增加，但其 活性增加幅度不大，而且根中Na”等积累很少，表明根中液泡膜质子泵在根系水平上的 离子区域化中不起主要作用（对于根的皮层来说可能有重要作用），而地上部分质子泵 （主要是V－H”－ATPase）在地上部分离于区域化中可能担当重要角色。 2 KCI处理对碱蓬生长和液泡膜质子泵的效应 二．二生长和离子积累 碱蓬能很好的适应NaCI胁迫，NaCI胁迫不但没有造成伤害，还促进了碱蓬生长。 低浓度（100 nunol／L）KCI既没有抑制生长也没有促进生长，而高浓度（200，400 mmol几） KCI对碱蓬不但无利，反而有害，严重抑制碱蓬的生长，甚至导致碱蓬死亡。KCI胁迫 下，碱蓬幼苗含水量比对照下降，KCI浓度越大下降越显著，KCI对碱蓬伤害大的一个 原因是水分吸收速率小于蒸腾速率，使碱蓬水分代谢严重失衡。碱蓬在NaCI胁迫后， 吸水速率大于蒸腾速率，不但没有失水，含水量反而高于对照。KCI胁迫下，碱篷不发 生肉质化，而同浓度的NaCI促进碱蓬肉质化，Na”可能是促进碱蓬肉质化的主要因子， 而 K”和 CI不能促进碱蓬肉质化。KCI胁迫下碱蓬细胞汁液0 浓度增加幅度远大于 NaCI胁迫下细胞汁液CI“浓度增加幅度，KCI胁迫下在地上部分积累过多的CI”可能是 KCI胁迫伤害程度大的原因之一。KCI胁迫比NaCI胁迫时碱蓬的相对电导率升幅大， 表明 KCI对细胞膜伤害程度大。 2．二质子泵活性与亚基表达 相同浓度的 NaCI和 KCI（200。of几）胁迫后，地上部分 V－H”－ATPase各亚基数 目和表达形式与对照相同。＊＊口胁迫后，地上部分?