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蜱是一类营专性寄生生活的吸血节肢动物,可以传播多种病原,蜱的控制对畜牧业生产和人类健康都具有重要意义。唾液腺作为蜱的重要器官,在蜱吸血过程中,分泌许多重要功能分子;这些分子对蜱吸血和病原传播都具有重要意义。为了解蜱吸血和病原传播的分子机制,寻找新的抗蜱疫苗候选分子,本研究以蜱唾液腺吸血前后消减文库EST序列信息为基础,通过基因克隆途径,从亚洲璃眼蜱和镰形扇头蜱的唾液腺中各鉴定了一个免疫抑制蛋白P36同源性分子,分别命名为HA36和RH36。RH36是镰形扇头蜱唾液腺中鉴定的免疫抑制分子,编码基因的全长序列为844bp,开放阅读框为81bp ~734bp,编码218个氨基酸,预测分子量约为24 ku;对编码的氨基酸进行信号肽分析,发现有一个由21个氨基酸组成的信号肽。其编码区内存在5个N-糖基化位点、10个磷酸化位点、3个豆蔻酰化位点。BlastX分析发现RH36与已报道的其他种类的蜱唾液腺免疫抑制蛋白P36具有显著的同源性。将RH36基因的编码序列亚克隆到pGEX-4T-1原核表达载体,并转化到表达菌BL21(DE3),经IPTG诱导,成功进行了体外融合表达。通过显微注射方法,进行RH36基因的双链RNA干扰实验,经免疫荧光实验和Real-time PCR实验分析,干扰组的蜱唾液腺中蛋白表达和基因表达显著减少,表明RH36基因被有效干扰。与对照相比,干扰组蜱在兔体吸血过程中,48小时吸附率下降22.86%,饱血雌蜱产卵率下降近60%,说明RH36与蜱的吸血和繁殖过程有关。HA36是亚洲璃眼蜱唾液腺中鉴定的免疫抑制分子,编码基因的全长序列为924bp,开放阅读框为44bp~752bp,编码235个氨基酸,预测分子量约为27 ku,等电点为9.78。对编码的氨基酸进行信号肽分析,发现有一个由19个氨基酸组成的信号肽。其编码区内存在6个N-糖基化位点、7个磷酸化位点和1个豆蔻酰化位点。BlastX分析发现HA36与已报道的其他种类的蜱唾液腺免疫抑制蛋白P36具有显著的同源性。RT-PCR分析表明,该基因在未吸血成蜱中没有表达,仅表达于吸血后成蜱,说明该蛋白在蜱吸血过程中被诱导表达。将HA36基因的编码序列亚克隆到pGEX-4T-1原核表达载体,并转化到表达菌BL21(DE3),经IPTG诱导,成功进行了体外融合表达。综上所述,本研究首次克隆、表达了镰形扇头蜱和亚洲璃眼蜱的免疫抑制蛋白HA36和RH36基因,并用RNAi的方法对RH36功能进行了初步研究,为蜱唾液腺的免疫抑制蛋白深入研究奠定了基础。