本文制备了三种蛋白抗原转运载体，脂质体、膜融合脂质体和重组仙台病毒体。脂质体不仅可作为疫苗给药载体，而且同时具有免疫佐剂作用。膜融合脂质体和重组仙台病毒体是利用病毒感染细胞的机理，将其包裹的蛋白抗原以膜融合的方式特异性地导入到细胞质内。仙台病毒膜表面的两种糖蛋白-F蛋白和HN蛋白直接参与膜融合。HN蛋白提供吸附作用，使其吸附于含有唾液酸受体的细胞表面：而F蛋白可以与细胞膜的脂质层相互作用，介导病毒—细胞或细胞—细胞的融合，使抗原以内源性抗原进行加工呈递。 本研究中所用的蛋白抗原是利用硫酸铵梯度沉淀法从培养的B16黑色素瘤细胞中提取的混合蛋白质，将其分别包裹于三种载体，制备黑色素瘤疫苗，对其理化性质、包封率、稳定性、体外释药规律、安全性及药效学等进行考察。 一、以大豆卵磷脂、胆固醇为脂质材料，制备脂质体；将从B16黑色素瘤细胞中提取的混合蛋白质作为抗原包裹其中，制备以脂质体为载体的疫苗；对其理化性质、包封率、稳定性、体外释药规律等进行考察。采用三个剂量组免疫黑色素瘤肿瘤模型小鼠，与空白对照组相比，考察其所诱导的体液和细胞免疫、抑瘤和抗肿瘤攻击效果。结果表明，脂质体为载体的黑色素瘤疫苗粒径分布均匀，大小在110 nm左右，包封率(测定法I：10．6±1．51；测定法11：8．3±0．78)和体外释放度(测定法1：41％；测定法Ⅱ：25％)都较低，置于充氮绝氧密封棕色安瓿中的疫苗于4℃长期留样6个月，稳定性较好。免疫小鼠后，三个剂量组都可以诱发体液免疫，但都不能诱发细胞毒T淋巴细胞反应。免疫后进行肿瘤攻击，可以抑制肿瘤的生长，降低肿瘤的接种成功率，延长小鼠的存活时间，且疗效均随剂量的增加而增加。 二、脂质体为载体的黑色素瘤疫苗与紫外灭活的仙台病毒融合，制备以仙台病毒膜融合脂质体为载体的疫苗；对其理化性质、包封率、稳定性、体外释药规律等进行考察，并采用罗丹明R18荧光标记法测定不同温度下病毒与脂质体的膜融合速率。采用三个剂量组免疫黑色素瘤肿瘤模型小鼠，与空白对照组相比，考察其所诱导的体液和细胞免疫、抑瘤和抗肿瘤攻击效果。结果表明，膜融合脂质体为载体的黑色素瘤疫苗粒径分布均匀，大小在200 nm左右：包封率(测定法Ⅰ：11．4±2．40；测定法Ⅱ：8．07±0．40)和体外释放度(测定法Ⅰ：33％：测定法Ⅱ：21％)都较低，置于充氮绝氧密封棕色安瓿中的疫苗于4℃长期留样6个月，稳定性良好。膜融合速率研究结果表明，37℃时膜融合速率最高。免疫小鼠后，既可以诱发体液免疫，又可以诱发强烈的细胞毒T淋巴细胞反应。免疫后进行肿瘤攻击，可以显著抑制肿瘤的生长，降低肿瘤的接种成功率，延长小鼠的存活时间，且疗效均随剂量的增加而增加。 三、采用提取去污剂的方法制备重组仙台病毒体；将从培养的B16黑色素瘤细胞中提取的混合蛋白质作为抗原包裹其中，制备重组仙台病毒体为载体的黑色素瘤疫苗；对其理 沈阳药科大学博t学位论文摘要化性质、包封率、稳定性、体外释药规律等进行考察。采用三个剂量组免疫黑色素瘤肿瘤模型小鼠，考察其所诱导的体液和细胞免疫、抑瘤和抗肿瘤攻击效果。结果表明，重组仙台病毒体为载体的黑色素瘤疫苗粒径分布均匀，大小在120nm左右，包封率(测定法I:H.3士1.40;测定法n:&27士0名6)和体外释放度(测定法I:30%;测定法n:18%)都较低，置于充氮绝氧密封安瓶中的疫苗于室温下长期留样6个月，稳定性良好。免疫小鼠后，既可以诱发体液免疫，又可以诱发强烈的细胞毒T淋巴细胞反应。免疫后进行肿瘤攻击，可以显著抑制肿瘤的生长，降低肿瘤的接种成功率，延长小鼠的存活时间，且疗效均随剂量的增加而增加。 对以上三种黑色素瘤疫苗的药效学进行比较，发现: 1.在能否诱发细胞毒T淋巴细胞反应方面，脂质体为载体的黑色素瘤疫苗不能诱发CTL反应，而其它两种疫苗都可以;其中，重组仙台病毒体为载体的黑色素瘤疫苗所诱发的CTL反应更强烈。 2.在肿瘤接种的成功率方面，重组仙台病毒体为载体的疫苗<膜融合脂质体为载体的疫苗<脂质体为载体的疫苗。 3.在接种肿瘤小鼠的存活期方面，重组仙台病毒体为载体的疫苗>膜融合脂质体为载体的疫苗>脂质体为载体的疫苗。 4.在抑制肿瘤增长方面，重组仙台病毒体为载体的疫苗>膜融合脂质体为载体的疫苗>脂质体为载体的疫苗。 综上所述，本文制备的三种黑色素瘤疫苗的药效是:重组仙台病毒体为载体的疫苗>膜融合脂质体为载体的疫苗>脂质体为载体的疫苗。本文为治疗性肿瘤疫苗的研究提供了新的思路，对肿瘤疫苗载体方面的研究奠定了良好的基础。