目的:利用母体外周血中的胎儿游离DNA进行非整倍染色体的无创产前检测(Non-invasive Prenatal Testing,NIPT)已广泛应用于临床,由于胎儿游离DNA不能包含胎儿全部遗传信息,因此NIPT难以应用于单基因病检测。孕妇外周血中含有少量胎儿有核红细胞(fetal nucleated red blood cells,fNRBCs),可以作为无创产前诊断的样本来源,本研究拟探索一种无创方式获取fNRBCs的新方法用于诊断单基因病。方法:首先本研究以外周血中的淋巴细胞为材料,验证激光捕获显微切割(laser capture microdissection,LCM)捕获单细胞的可行性,应用多次退火环状循环扩增(multiple annealing and looping-based amplification cycles,MALBAC)方法进行单细胞全基因组扩增(whole genome amplification,WGA),摸索WGA的最佳实验条件。其次从24例男胎孕妇外周血捕获NRBCs,通过扩增SRY基因确认fNRBCs的存在并统计该方法的成功率。然后收集12例有单基因病的家系包括5例杜氏肌营养不良(duchenne muscular dystrophy,DMD)家系、3例脊肌萎缩症(spinal muscular atrophy,SMA)家系、2例遗传性耳聋家系、1例Duane桡侧列综合征(duane radial ray syndrome,DRRS)家系和1例早发性癫痫性脑病(early onset epilepsy encephalopathy,EOEE)家系,先对家系进行遗传咨询,明确先证者的遗传病因,接着对12名有单基因病家族史的孕妇采用LCM捕获fNRBCs进行Sanger测序或多重连接探针扩增技术(multiplex ligation dependent probe amplification,MLPA)进行检测并与羊水结果对比,结合MALBAC建立LCM-NIPT技术。结果:(1)24名男胎孕妇中有9例外周血中检出了fNRBCs,成功率为37.5%(9/24)。(2)利用LCM-NIPT技术,12名有单基因病家族史的孕妇中有7名孕妇被检出fNRBCs,对其中5例fNRBCs进行Sanger测序分析,最终完成2例DMD,1例DRRS和1例EOEE的产前诊断,1例先天性耳聋家系fNRBC因扩增发生等位基因脱扣(allele drop-out,ADO)而检测失败,2例SMA家系fNRBCs的MLPA检测均未成功。结论:利用LCM获取单个fNRBC,经MALBAC全基因组扩增后结合Sanger测序技术,可实现单基因病的点突变检测,在遗传病的无创产前筛查和诊断具有较大的应用前景。