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目的:建立可溶性共刺激分子CD80的免疫放射分析方法(IRMA),探讨其临床应用。方法:①采用Iodogen法进行抗CD80单抗10D9的125I标记,分别改变Iodogen的用量、抗体的用量、125I的活度及反应时间,摸索在不同条件下标记的效果,寻找一最佳标记条件;标记产物用Sephadex G-50分离纯化,三氯醋酸(TCA)法测定其标记率和放化纯;将125I-10D9与不同细胞数的人B细胞淋巴瘤Daudi细胞悬液在37℃细胞培养箱中反应,测定标记物的免疫活性;将标记物分别加入到生理盐水、血清及0.05M pH7.4的PBS液(含1%BSA)中,另取标记物不稀释作为对照,分别置于37℃及4℃条件下,观察放置3d、1w、2w、3w、4w、6w后标记物的稳定性。②采用物理吸附法制备单克隆抗体4E5的固相包被管,用不同浓度的抗体、不同pH的缓冲液包被试管,并选择适宜的反应温度及时间、最佳封闭时间等,以确定最佳包被条件;将制备好的固相抗体分别放置于37oC及4oC条件下,储存1w、2w、4w、6w、8w后,测定其与抗原的免疫结合,观察其稳定性。③建立双位点夹心可溶性CD80分子的IRMA,检测各类自身免疫性疾病及肿瘤患者血清中的CD80含量并与正常对照组比较。结果:①125I标记10D9的最佳条件为:Iodogen用量10μg、10D9用量20μg、加入Na125I 22.2 MBq、室温反应8min,125I-10D9的标记率和放化纯达到最佳水平,标记率为(84.10±3.18)%,放化纯为(98.49±1.14)%,比活度为933.51MBq/mg;125I-10D9与Daudi细胞的结合率随细胞数的增加而增加,当细胞数为1×107时结合率达到最高水平,此时总细胞结合率为(25.77±1.07)%,特异性细胞结合率为(23.15±1.07)%;标记物加入到不同稀释液中后,在4℃条件下,对照组及人血清组1w后、PBS组3w后放化纯度仍大于90%;在37℃条件下,对照组3d后、人血清组1w后、PBS组2w后放化纯度仍大于90%;而生理盐水组放置3d后放化纯即明显下降(P<0.01)。②4E5固相包被管制备的最佳条件为:用0.05M pH 7.4的磷酸盐缓冲液稀释抗体4E5至8.0mg/L,室温反应24h;包被好的试管用2%的BSA封闭,封闭时间6~8h为佳;包被管在4℃条件下放置8w仍保持很好的稳定性。③建立的可溶性CD80分子IRMA,其灵敏度为0.14μg/L,批内变异系数为6.46%~7.87%,批间变异系数为7.89%~9.27%,回收率为86.64~104.05%;该方法检测的各类标本结果显示,类风湿性关节炎、甲亢、桥本氏病、慢性肾炎、糖尿病及B细胞淋巴瘤患者血清中的CD80含量明显高于正常对照组(P<0.01),而恶性肿瘤患者血清中的CD80含量明显低于正常对照组(P<0.01)。结论:本研究建立的可溶性CD80分子的免疫放射分析法,操作简便,方法学稳定,有重要的临床应用价值。