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我国是乙肝高发区，研究慢性乙肝感染、发展有效的抗病毒治疗具有重大的社会意义。慢性乙肝感染过程中，针对病毒特异的效应细胞通常处于耐受或耗竭状态。主动免疫能够暂时性激活效应T细胞，但特异性免疫和免疫记忆反应很快回复到病毒持续性感染形成的免疫耐受状态。因此我们提出一种基于外源性抗原T细胞应答的免疫治疗概念，设计构建了一种重组乙肝病毒(rHBV)。rHBV基于野生乙肝基因组构建，并引入外源性抗原表位;由于rHBV和野生乙肝病毒(wtHBV)具有相同的复制机制，rHBV激活的外源性T细胞应答将最终控制野生病毒的持续性感染。为了使这种治疗策略有实际应用性，我们采用重组腺病毒载体(rAd)携带rHBV，证实能够有效转导稳定产生野生乙肝病毒的肝细胞系，被携带的rHBV相对于野生病毒具有显著的复制优势;同时，应用原代树鼩肝细胞证实rHBV子代病毒具有感染性。这些结果极大扩增了rHBV重组腺病毒载体在慢性乙肝感染中的抗病毒效应。我们同时建立了携带wtHBV重组腺相关病毒载体(rAAV)的慢性乙肝感染小鼠模型。应用rHBV重组腺病毒的主动免疫策略证实能够清除小鼠模型中慢性乙肝感染并实现乙肝病毒抗原的血清转换。此研究展示了打破免疫耐受、清除慢性乙肝感染的有效治疗策略。 母婴垂直传播是导致慢性乙肝感染高发病率的重要原因之一。为了模拟母婴传播，我们构建了PEPCK/S2S转基因小鼠，应用大鼠磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(PEPCK)启动子控制HBV前S2抗原和表面抗原(HBsAg)的表达，PEPCK启动子的下游基因具有肝脏表达特异性和出生后立即表达的时效性。pPEPCK-S2S质粒体外转染肝细胞系Huh-7能检测到表面抗原(HBsAg)特异表达。小鼠刚出生1天后血液和肝脏中均能检测到HBsAg一过性表达，出生5天后检测不到。分离成年小鼠脾脏的淋巴细胞体外扩增并刺激后，能检测到特异的T细胞分泌IFN-γ;用HBV特异的DNA免疫成年小鼠，7天后在脾脏的淋巴细胞中即能检测到大量IFN-γ阳性T细胞，提示有HBV抗原特异性记忆T细胞应答。进一步实验仍在积极进行中。