利用Cyt b基因对未知鲸骨进行物种的鉴定

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由于鲸类是经济价值巨大的海洋资源,人类对其进行了大规模的商业猎杀。同时,由于其栖息地的破坏、减少和环境的恶化,一度使得某些物种濒于灭绝。鲸类数量的急剧减少引起了科学界的广泛关注,开展了一系列例如鲸类种群数量的调查和监测、鲸类搁浅网络的建立、鲸类误捕和偶然死亡原因的调查以及鲸类体内有毒物质的研究。80年代以来,随着分子生物学的迅猛发展,涌现出一批分子进化和种群遗传分析方法和技术,而这些技术也很快地被引入到鲸类保护生物学领域。本实验选用Cyt b基因序列作为分子标记,从分子生物学的角度对未知的鲸类骨骼样品进行了物种的鉴定,采用蛋白酶K消化法和苯酚/氯仿有机抽提法提取基因组DNA,并做了下述改进:骨粉在消化前用灭菌的纯水浸泡;消化液中蛋白酶K的终浓度提高至0.3mg/ml;有机抽提过程中苯酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提两遍,氯仿:异戊醇(24:1)抽提两遍。实验结果如下: 1.获得了样品V1、V2、V3、V5、R、Z1的基因组DNA,电泳检测呈现轻微片断化的迹象。 2.获得了样品V1、V2、V5、Z1的PCR扩增产物,电泳检测显示产物大小约为550bp。 3.测序获得样品V1、V2、V5、Z1的Cyt b基因部分序列,并且样品V2、V5、Z1的序列完全相同,为同一单倍型。 4.GenBank比对结果如下:样品V1与大村鲸的相似度最高,达99﹪;样品V2、V5、Z1与大西洋小须鲸的相似度最高,达98﹪。初步推断样品V1为大村鲸,样品V2、V5、Z1为大西洋小须鲸; 5.基于UPGMA法和NJ法构建的系统发育树均表明样品V1的Cyt b序列与大村鲸的同源序列聚类,置信度达100﹪;样品V2、V5、Z1的Cyt b序列与大西洋小须鲸的同源序列聚类,置信度为100﹪。支持GenBank的比对结果。 6.MEGA软件分析结果表明样品V1的Cyt b序列与相似度最高的大村鲸单倍型(登录号AB201257、AB201256)存在1~2个核苷酸差异,成为一个新的单倍型,这是我国南海的首次记录;样品V2、V5、Z1的Cvt b序列完全一样,为同一单倍型,但与相似度最高的大西洋小须鲸单倍型(登录号AJ554054)存在7个核苷酸差异,成为一个新的单倍型。
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