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目的:本试验以HIBD新生大鼠模型为研究对象,通过测定HIBD后14d各组新生大鼠体重增长率的变化,不同时间点神经细胞凋亡率、Bcl-2、Bax、HIF-1αmRNA表达的变化,探讨参麦注射液(SMI)对HIBD新生大鼠的保护作用及其可能机制。
方法:将新生7日龄 Sprague-Dawllcy(Sp)大鼠,随机分为假手术组(S)、SMI 预处理组(P)、SMI治疗组(SM)、生理盐水对照组(C)。每组按术后观察时闻点不同进一步分为HI后2h、12h、24h、3d、7d、14d、28d 7个亚组。把实验分成四部分:1.HI对新生大鼠体重增长率的影响及SMI的干预作用。2.流式细胞术检测(Annexin V/FITC双染色法)HI对新生大鼠右侧海马神经元凋亡率的影响及SMI的干预作用。3.免疫组织化学方法检测HI对新生大鼠右侧海马CA1区神经元Bcl-2、Bax蛋白表达的影响及SMI的干预作用。4.RT-PCR法检测HI后新生大鼠右侧大脑HIF-1amRNA.的表达情况及SMI的干预作用。
结果:
1.HI后14d各组新生大鼠体重增长率统计结果:C组、SM组、P组体重增长率与S组相比有差异(P<0.05),C组、SM组和P组体重增长率间比较无差异(P>0.05)。
2.HI后神经细胞凋亡率统计结果:HI后2h P组、SM组、C组神经细胞凋亡率已有升高,24h达到高峰,3d开始下降,14d各组神经细胞凋亡率间比较无差异(P>0.05)。P组、SM组、C组神经细胞凋亡率在HI后2h、12h、24h、3d、7d观察点与S组比较有差异(P<0.05,P<0.01),P组、SM组、C组神经细胞凋亡率在14d、28d观察点与S组比较无差异(P>0.05)。P组、SM组神经细胞凋亡率在HI后12h、24h、3d、7d观察点与C组比较有差异(P<0.05,P<0.01),P组、SM组神经细胞凋亡率在HI后2h、14d、28d观察点与C组比较无差异(P>0.05)。P组与SM组神经细胞凋亡率在HI后各观察点比较无差异(P>0.05)。
3.HI后Bcl-2蛋白表达统计结果:HI后2hP组、SM组、C组右侧大脑海马CA1区Bel-2蛋白表达已有升高,24h达到高峰,14d各组右侧大脑海马CA1区Bcl-2蛋白表达比较无差异(P>0.05)。P组、SM组、C组右侧大脑海马CA1区Bcl-2蛋白表达在HI后2h、12h、24h、3d、7d观察点与S组比较有差异(P<0.05,P<0.01),P组、SM组、C组右侧大脑海马CA1区Bcl-2蛋白表达在HI后14d、28d观察点与S组比较无差异(P>0.05)。P组、SM组右侧大脑海马CA1区Bcl-2蛋白表达在HI后24h、3d,7d观察点与C组比较,Bcl-2蛋白表达较C组高,有差异(P<0.05,P<0.01,),P组、SM组右侧大脑海马、CA1区Bcl-2蛋白表达在HI后2h,14d、28d观察点与C组比较无差异(P>0.05)。P组与SM组右侧大脑海马CA1区BcI-2蛋白表达在HI后各观察点比较无差异(P>0.05)。
4.HI后Bax蛋白表达统计结果:HI后2h P组、SM组、C组右侧大脑海马CA1区Bax蛋白表达已有升高,24h达到高峰,14d各组右侧大脑海马CA1区Bax蛋白表达无显著性差异(P>0.05)。P组、SM组、C组右侧大脑海马CA1区Bax蛋白表达在HI后2h、12h、24h,3d、7d观察点与S组比较有差异(P<0.05,P<0.01),P组、SM组、C组右侧大脑海马CA1区Bax蛋白表达在HI后14d、28d观察点与S组比较无差异(P>0.05)。P组、SM组右侧大脑海马CA1区Bax蛋白表达在HI后12h、24h、3d、7d观察点与C组比较,Bax蛋白表达较C组降低,有差异(P<0.05,P<0.0d),P组、SM组右侧大脑海马CA1区Bax蛋白表达在HI后2h、14d、28d观察点与C组比较无差异(P>0.05)。P组与SM组右侧大脑海马CA1区Bax蛋白表达在HI后各观察点比较无差异(P>0.05)。
5.HI后HIF-1αmRNA表达统计结果:HI后2h P组、SM组、C组右侧大脑HIF-1αmRNA表达已有升高,24h达到高峰,14d各组右侧大脑HIF-1α表达无差异(P>0.05)。P组、SM组、C组右侧大脑HIF-1αmRNA表达在HI后2h、12h、24h、3d、7d观察点与S组比较有差异(P<0.05,P<0.01),P组、SM组、C组右侧大脑HIF-1αmRNA表达在HI后14d、28d观察点与S组比较无差异(P>0.05)。P组、SM右侧大脑HIF-1 αmRNA表达在HI后12h、24h、3d、7d观察点与C组比较,HIF-1αmRNA 表达较C组高,有差异(P<0.05,P<0.01),P组、SM组右侧大脑HIF-1 αmRNA表达在HI后2h、14d、28d观察点与C组比较无差异(P>0.05)。P组与SM组右侧大脑HIF-1 αmRNA表表在HI后各观察点比较无差异(P>0.05)。
结论:(1) HI后新生大鼠体重增长较慢,SMI对HI后新生大鼠体重增长无显著影响。(2) HI后新生大鼠神经细胞凋亡率明显增加,SMI可减少HI新生大鼠神经细胞凋亡的发生。(3)HI后新生大鼠右侧大脑海马CAl区Bcl-2、Bax蛋白表达明显增加, SMI可提高HI新生大鼠右侧大脑海马CA1区Bcl-2的表达,降低Bax蛋白表达。(4) HI后新生大鼠右侧大脑HIF-1 αmRNA表达明显增加,SMI可提高HI新生大鼠右侧大脑HIF-1 αmRNA 的表达。