mRNA差异显示技术研究低温条件下深黄被孢霉M6-22基因的表达差异

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被孢霉属是毛霉目中具有重要经济价值的丝状真菌,它们可以产生一系列多不饱和脂肪酸,包括深黄被孢霉在内的一些种已作为利用微生物法生产多不饱和脂肪酸的主要生产菌。前期的研究表明,深黄被孢霉M6-22具有低温生长适应性,因此本研究采用mRNA差异显示技术分析M6-22低温条件下的基因表达差异情况。以15℃和30℃培养的M6-22菌体总RNA作为模板,用9种锚定引物和10种随机引物组合进行DDRT-PCR,经6%变性PAGE和硝酸银染色,共得到48个差异条带,片段长度为250~1600bp左右,并进行克隆测序,经比对分析,剔除冗余序列,最后得到35条序列。经荧光定量PCR验证,最后确定15℃培养条件下有21个基因的表达水平发生变化,其中16个基因表达上调,5个基因表达下调。可将鉴定成功的基因分成3类,以分子功能为依据可以将差异表达基因编码的蛋白质分为水解酶、转移酶、连接酶、ATP结合蛋白、GTP结合蛋白、转运蛋白和假定蛋白等;以生物学途径为依据可以将差异基因编码的蛋白质分为细胞组件合成、糖代谢、核酸代谢、蛋白质代谢、有机酸代谢、蛋白质翻译和修饰、转录、运输等相关的生命途径;以细胞组件为依据可以将差异基因编码的蛋白质分为细胞膜、细胞器、细胞质、细胞核、细胞骨架等细胞组件。本文首次通过转录水平上对深黄被孢霉低温条件下基因的表达调控机制进行了探索,为深入了解深黄被孢霉对外界低温信号的应答机制提供了有用信息,也对应用深黄被孢霉进行工业化发酵生产有用产品具有指导意义。
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