【摘 要】
:
植物的泛素化途径在其生长发育和对内外环境信号应答调控中发挥重要作用。泛素分子在多种酶的协作下结合于靶标蛋白,实现泛素化标记蛋白质的降解或修饰。其中决定靶标蛋白特异性的E3连接酶以复合物或单亚基形式发挥泛素连接功能,对番茄单亚基形式E3连接酶的研究相对较少。番茄SlSL1(Solanum lycopersicum SINA-like 1)基因具有RING型E3连接酶结构域,但对其泛素连接酶活性及生物
论文部分内容阅读
植物的泛素化途径在其生长发育和对内外环境信号应答调控中发挥重要作用。泛素分子在多种酶的协作下结合于靶标蛋白,实现泛素化标记蛋白质的降解或修饰。其中决定靶标蛋白特异性的E3连接酶以复合物或单亚基形式发挥泛素连接功能,对番茄单亚基形式E3连接酶的研究相对较少。番茄SlSL1(Solanum lycopersicum SINA-like 1)基因具有RING型E3连接酶结构域,但对其泛素连接酶活性及生物学功能尚未分析。本文通过克隆番茄SlSL1基因、构建原核重组表达质粒,并利用诱导表达、亲和吸附纯化SlSL1重组蛋白,以此进行SlSL1的体外泛素化活性检测。SDS-PAGE电泳及蛋白印迹结果显示,由所构建番茄SlSL1原核表达质粒纯化获得了预期SlSL1重组蛋白;体外泛素化反应中SlSL1形成多聚化泛素条带,表明其可以进行自身泛素化,具有E3泛素连接酶功能。通过构建pBI121-SlSL1过表达遗传转化载体,利用农杆菌介导遗传转化将具有E3连接酶活性的SlSL1基因在番茄中过量表达。经定量PCR检测,获得了SlSL1过表达番茄株系。与野生型相比,转基因幼苗的生长发育未显示明显差异。但接种丁香假单胞菌番茄致病变种(Pseudomonas syringae pv.tomato)菌株Pst DC3000后,SlSL1过表达植株对病原菌的抗性显著高于野生型,叶片病斑减少,病原菌增殖数目明显降低,提示SlSL1通过泛素化途径参与番茄抗病防御反应。为进一步探讨SlSL1所调控靶标蛋白,利用番茄多种组织所构建酵母双杂交文库,对SlSL1互作蛋白进行筛选。初步获得6个候选靶标序列:polyubiquitin、ubiquitin-60S ribosomal protein L40、IQ-DOMAIN 14-like、glycine-rich protein 2-like、glycosyltransferase、hsp70-Hsp90 organizing protein 2,为探讨番茄SlSL1基因作用机制提供了线索。此外,SlSL1过表达对番茄植株生长、开花时间、果实重量、大小,以及果实和种子发育均未有明显不利影响,但可增强番茄对病原细菌的防御能力,具有遗传改良应用潜力。因此本工作为深入研究番茄E3泛素连接酶SlSL1的免疫应答调控功能及其作用机制奠定了重要基础,也为番茄抗病遗传改良提供了新的基因资源。
其他文献
奶牛场废水中含有高浓度的有机物、大量人畜共患病原微生物及抗生素抗性基因。人畜共患的病原微生物会引起一系列疾病,例如口蹄疫、腹泻等。抗生素抗性基因作为一种新兴环境污染物,对动物及人体健康都存在潜在的危害。奶牛场废水直接排放可能会引起严重的生物安全性问题。奶牛场废水常用厌氧消化法处理,该方法可以将易生物降解的有机物转化为清洁能源甲烷,但对木质纤维素等有机物降解效果不好,且对抗生素抗性基因的影响十分复杂
干旱灾害(旱灾)长久以来对人类社会、经济发展、生态环境造成了巨大损失。近年来随着社会经济的不断发展和气候环境的变化,旱灾发生频次也呈不断增多趋势,旱灾风险已成为影响经济社会发展、粮食安全和生态安全的重要制约因素。旱灾脆弱性是旱灾风险系统中的主要部分,是干旱致灾危险性转换为旱灾损失风险的关键环节,及时有效地诊断出旱灾脆弱性的主要影响因子可为旱灾风险防控提供重要的决策依据。为有效管理旱灾风险,论文针对
森林冠层的几何结构特征直接影响森林截获太阳辐射的程度以及截留大气降水的能力,进而影响到林冠和外界大气环境之间的能量交换。森林冠层结构参数描述了森林不同尺度的几何特征。在植被遥感领域,可以用冠层间隙率和聚集度指数等参数来表示冠层的结构特征。对于离散森林冠层,树冠形状与地形对冠层间隙率和聚集度指数有重要影响,因此在森林冠层模型中需要对其进行准确描述。几何光学模型从物理机制上描述了冠层结构特征与冠层间隙
无刷双馈电机是一种新型结构的感应电机,其结构简单,运行可靠,且具有良好的调速性能。随着工业应用的发展,无刷双馈电机不仅作为发电机被应用于风力发电和水力发电领域,还作为电动机被应用于电力拖动及煤矿等工业生产领域中。随着控制技术的发展和成熟,无刷双馈电机广泛应用于变频调速领域。为提高电机起动性能,本文提出了一种软起动方法来消减冲击电流。该方法的核心是重构定子功率绕组和转子绕组。采用绕线式转子的无刷双馈
挖掘与鉴定影响奶牛产奶性状的关键基因是改善牛奶品质的关键步骤。课题组前期基于转录组测序确定DNA损伤诱导转录因子3(DNA damage induced transcript 3,DDIT3)(p=4.01E-05)为奶牛产奶性状重要的候选基因。因此,本研究首先通过大群验证对DDIT3进行遗传效应分析,进一步通过DDIT3干扰实验验证其功能,结果如下:(1)遗传效应分析:通过混池测序检测DDIT3
本文以锌铜比为3的三个不同浓度的硝酸锌-硝酸铜基础溶液作为反应体系,对Zn(NO3)2、Cu(NO3)2定量下Fe(NO3)3-Mn(NO3)2-H2O相平衡以及KNO3-Mn(NO3)2-H2O相平衡进行了研究,为制备适宜中草药的水溶肥料提供理论依据;同时分析了中草药的需肥特性,制备了相应的水溶肥料,并开展了浸种试验。采用等温溶解平衡法研究了定比例不同Zn(NO3)2和Cu(NO3)2浓度下Fe
波浪能作为地球上储存含量最大的几种能源之一,其被开发的潜力是巨大的。结合其宽频,振幅分布广,多方向等特点对波浪能进行深度的开发,能够有效地将水波能转换成大量的便捷能源。但面对目前的开发条件,还有大量的工作需要我们去完成来提高能量回收效率。本文通过结合波浪能自身特点,提出一种具有双稳态,宽振幅的仿生水母型能量回收装置。该装置主要通过对弹簧钢结构进行优化设计,在固定弹簧钢两端的情况下,使其自身产生弯曲
颗粒物污染会对人体的健康造成损害,对颗粒物检测是提高人类健康生活水平的重要保障,数字全息在颗粒物检测方面有着巨大的应用潜力。本文通过在系统中加入光栅的方式提高了离轴全息系统的分辨率,搭建了一种离轴数字全息颗粒物检测系统,相较于传统的离轴装置,系统的分辨率有了大幅度提高。首先,从传统光学全息出发,阐述了数字全息的基本理论,比较了同轴全息与离轴全息各自的优缺点,提出了离轴全息分辨率较低的问题。之后介绍
多花黄精(Polygonatum cyrtonema Hua)是药食同源植物,富含多糖,具有补脾润肺、抗疲劳、降血脂等功效。动脉粥样硬化是脂代谢异常引发的慢性炎症疾病,目前鲜有关于多花黄精多糖干预小鼠动脉粥样硬化的报道。课题组前期研究发现多糖具有良好的抗动脉粥样硬化活性,因此本论文以多花黄精多糖(P.cyrtonema polysaccharide,PCP)为实验材料,主要研究了PCP对高脂饮食(
近年来,集成电路制造工艺的水平正在不断地提升,基于互补金属氧化物半导体(Complementary Metal-Oxide-Semiconductor,CMOS)的技术正在逐步接近它的物理极限,诸如量子效应、漏电流效应和功率耗散等问题变得越发突出,这些二级效应严重影响了集成电路的进一步发展。为了继续缩小电路和提高微处理器的性能,CMOS的替代品必不可少。量子点元胞自动机(Quantum-dot c