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目的:体外分离培养鉴定大鼠骨髓间充质干细胞(Rat bone marrow mesenchymal stem cells,Rat BM-MSCs)并初步探究其对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的治疗作用。方法:1.取SPF级大鼠骨髓,贴壁培养法获得BM-MSCs,观察细胞形态、对P3代细胞进行细胞表面抗原标志物CD29、CD90、CD106、CD45鉴定以及BM-MSCs成骨、成脂分化鉴定。2.取20只雌性C57BL/6小鼠,随机分为三组:正常对照组(Control组)、PBS组和Rat BM-MSCs组。Rat BM-MSCs细胞移植后小鼠作为Rat BM-MSCs组,PBS移植后小鼠作为PBS组,未作处理小鼠作为正常对照组。MOG35-55联合完全弗氏佐剂充分乳化后,背部皮下多点注射免疫,诱发小鼠EAE。3.小鼠免疫后第38d腹腔注射Rat BM-MSCs(1×106cells/200μl)进行治疗,PBS组注射等体积PBS,10d后再次治疗,每天进行神经功能评分观察各组小鼠神经功能变化。4.二次移植治疗12d后取各组小鼠脊髓:HE染色及Luxol Fast Blue染色观察脊髓炎性细胞浸润以及髓鞘脱失情况;5.Rat BM-MSCs细胞二次移植后第12d获取各组小鼠脾脏制成单细胞悬液,脾细胞CFSE标记后10μg/ml ConA和MOG35-55刺激培养3d,收细胞,流式细胞术检测脾细胞增殖情况;6.Rat BM-MSCs细胞二次移植后第12d收集小鼠外周血血清,Ellisa技术检测正常对照组、PBS组和Rat BM-MSCs组外周血中细胞因子:干扰素γ(IFN-γ),白介素17(IL-17)的含量。结果:1.Rat BM-MSCs成功分离培养,P3代细胞呈梭形或多角形,呈典型旋涡状生长;流式细胞术显示Rat BM-MSC P3代细胞表达抗原CD29、CD90、CD106,不表达CD45;BM-MSCs体外诱导能向成骨及成脂方向分化。2.C57BL/6小鼠发病后,EAE小鼠神经功能症状加重,临床评分逐渐升高,BM-MSCs移植后,Rat BM-MSCs组小鼠神经功能缺损症状较PBS组减轻,评分降低,二次移植后临床症状维持进一步好转。3.HE染色结果显示,Rat BM-MSCs组脊髓炎性细胞浸润比同时间点PBS组减轻(P<0.05);Luxol Fast Blue染色结果显示,Rat BM-MSCs组脱髓鞘比同时间点PBS组减轻(P<0.05);病理结果分析,BM-MSCs移植后小鼠脊髓炎症浸润和脱髓鞘情况得以改善。4.流式细胞术分析,ConA和MOG35-55刺激培养3d后,PBS组和Rat BM-MSCs组脾细胞增殖明显增加,而Rat BM-MSCs组又较PBS组降低。5.ELISA结果分析,与正常对照组相比,PBS组小鼠外周血血浆中促炎细胞因子IFN-γ、IL-17含量升高;与PBS组相比,Rat BM-MSCs组小鼠外周血血浆促炎细胞因子IFN-γ、IL-17含量降低(P<0.05)。结论:全骨髓贴壁培养法能有效分离纯化BM-MSCs,大鼠BM-MSCs移植对小鼠EAE模型有治疗作用,且其治疗机制可能与抑制EAE小鼠体内炎性T细胞增殖和调节细胞因子的分泌有关。