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本课题主要是对昆布多糖(Lanunarin)的修饰产物昆布多糖硫酸酯(LAMS)的性质结构进行分析,并对其在前列腺癌细胞中的作用进行研究。
昆布多糖经硫酸酯化后,构象发生了改变,生成的昆布多糖硫酸酯(LAMS)具有多种生物活性,能有效抑制肿瘤细胞增殖。利用氯磺酸-吡啶法对昆布多糖进行硫酸酯化修饰,所得产物LAMS的纯度为96%,其分子量为16315Da,SO42-含量为41.30%;紫外、红外光谱分析结果均显示硫酸酯化多糖的光谱特征,13C-NMR谱显示多糖的2位羟基为SO42-的主要取代位置。
本实验以体外培养的非激素依赖型人前列腺癌细胞株PC-3经LAMS处理,以WST-8、流式细胞术(FCM)及Annexin V-FITC/PI双染色法观察细胞增殖、细胞周期及早期凋亡率;以RT-PCR及Western Blot检测PC-3细胞增殖、凋亡相关基因PTEN、P27kipl、Caspase-3、BCL-2 mRNA和蛋白的表达,探讨LAMS对前列腺癌细胞的作用及可能的作用机制。
结果表明,随着LAMS浓度的增加和作用时间的延长,对PC-3细胞的生长抑制率逐渐增高,呈时间.剂量效应。50μg/mL的LAMS对PC-3细胞增殖无明显的抑制作用,100μg/mL和200μg/mL的LAMS对PC-3细胞增殖有明显的抑制作用。流式细胞仪分析显示,随着LAMS浓度的增加,PC-3细胞凋亡率逐渐增高;荧光显微镜观察发现,随着LAMS浓度的增加,PC-3细胞凋亡小体逐渐增多,甚至出现细胞死亡。随着LAMS浓度增加PC-3细胞G1期细胞比例逐渐减少,S+G2期细胞比例呈剂量依赖性增加,表明存在S+G2期阻滞。RT-PCR及Western Blot结果显示,LAMS对PC-3细胞BCL-2基因mRNrA和蛋白表达均呈剂量依赖性减弱,对PC-3细胞PTEN、P27kip1、Caspase-3基因mRNA和蛋白表达均呈剂量依赖性增强。