目的:检测内蒙古地区蒙古族、汉族肝癌患者中FHIT、CDH13基因甲基化情况,分析FHIT、CDH13基因甲基化与肝癌的关系并明确FHIT、CDH13基因甲基化是否存在民族差异,明确槲皮素的去甲基化作用及与苯并芘(Ba P)对细胞周期、凋亡的相互作用。方法:采用甲基化特异性PCR法(Methylation Specific Polymerease Chain Reaction,MSP)检测内蒙古地区蒙、汉族健康人群和肝癌患者中FHIT、CDH13基因启动子区的甲基化情况;采用MSP法检测不同浓度槲皮素作用于Hep G2细胞后FHIT、CDH13基因的甲基化情况;采用实时荧光定量聚合酶链反应(q PCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测不同浓度槲皮素作用于Hep G2细胞后FHIT、CDH13基因以及DNA甲基化转移酶1(DNMT1)、转录因子Sp1的m RNA与蛋白表达的情况;应用流式细胞仪与Hochest33342法检测槲皮素与苯并芘(Ba P)对细胞周期、凋亡的相互作用。结果:(1)蒙古族肝癌患者中FHIT和CDH13基因甲基化率分别为72.00%(36/50)与64.00%(32/50),而蒙古族健康人群中FHIT和CDH13基因甲基化率分别为34.00%(17/50)与32.00%(16/50),经比较蒙古族肝癌患者与健康人群FHIT和CDH13基因甲基化率差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)汉族肝癌患者中FHIT和CDH13基因甲基化率分别为68.00%(34/50)与72.00%(36/50),汉族健康人群中FHIT和CDH13基因甲基化率分别为30.00%(15/50)与22.00%(11/50),经统计分析差异具有统计学意义(P<0.05)。(3)将蒙、汉族肝癌患者FHIT、CDH13基因甲基化率经比较发现不存在民族差异,无统计学意义(P>0.05)。(4)将蒙、汉族健康人群FHIT、CDH13基因甲基化率经比较发现不存在民族差异,无统计学意义(P>0.05)。(5)MSP检测结果表明:与control组相比随着槲皮素浓度增加FHIT、CDH13基因甲基化条带(M条带)亮度逐渐减弱,并出现非甲基化条带(U条带)特异性扩增且亮度逐渐增强,槲皮素对FHIT、CDH13基因甲基化具有一定程度的逆转作用。(6)q PCR与Western blot法检测结果表明与control组相比随槲皮素浓度的增加FHIT、CDH13基因的m RNA与蛋白表达逐渐增加,槲皮素中、高剂量组中FHIT、CDH13的表达结果与control组比较差异均具有统计学意义(P<0.05,P<0.01),随槲皮素浓度的增加DNMT1、Sp1的m RNA与蛋白表达逐渐减少,且与control组相比差异均具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。(7)流式细胞仪检测结果表明槲皮素低剂量+Ba P组、槲皮素中剂量+Ba P组、槲皮素高剂量+Ba P组与槲皮素低、中、高剂量组相比S期及G2/M期百分率均增多,其增强了对S期及G2/M期的阻滞作用,且高剂量组具有统计学意义(P<0.05);Hochest33342染色与流式细胞仪检测结果表明,随着槲皮素浓度的增加其诱导凋亡的作用逐渐增强,凋亡率为:低剂量组(38.43±0.77%)、中剂量组(42.20±0.57%)、高剂量组(59.76±0.58%)与槲皮素低剂量+Ba P组(36.83±0.47%)、槲皮素中剂量+Ba P组(38.18±0.56%)、槲皮素高剂量+Ba P组(43.43±0.46%)的凋亡率相比槲皮素单独作用于Hep G2细胞的凋亡率高于二者同时作用于Hep G2细胞的凋亡率,且低、中、高剂量组均具有统计学差异(P<0.05)。结论:FHIT、CDH13基因在肝癌患者中呈现高甲基化状态;FHIT、CDH13基因甲基化情况在内蒙古地区蒙、汉族肝癌患者之间不存在民族差异;FHIT、CDH13基因甲基化情况在内蒙古地区蒙、汉族健康人群之间不存在民族差异;槲皮素具有去甲基化的作用,其可能的机制是通过抑制Sp1,进而抑制DNMT1的表达,DNMTs活性被抑制或浓度过低时,就无法维持原有的甲基化状态,导致FHIT、CDH13基因去甲基化;槲皮素与Ba P均可以阻滞Hep G2细胞周期,且二者具有协同作用;对于细胞凋亡,Ba P和槲皮素均可以诱导Hep G2细胞的凋亡,但二者同时作用于Hep G2细胞时,细胞凋亡百分率降低,二者具有拮抗作用。