内淋巴囊HA合成酶mRNA和G蛋白的表达及其PGE2作用后的变化

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近年来研究表明,内淋巴囊(Endolymphatic Sac,ES)上皮细胞既能吸收由耳蜗的血管纹边缘细胞和前庭暗细胞分泌的内淋巴液,又能合成、分泌透明质酸(Hyaluronan,HA),产生较强的胶体渗透压,对调节内淋巴液容积和维持内淋巴系统的稳定起着重要作用。为进一步研究其离子主动转运过程和透明质酸的合成规律,本文采用酶消化和机械分离培养豚鼠内淋巴囊上皮细胞,经激光扫描共聚焦显微镜鉴定,倒置显微镜下连续观察了培养8天的内淋巴囊上皮细胞,确立了内淋巴囊上皮细胞的分离及体外培养技术,为研究内淋巴囊的形态和功能,以及有关干预因素对内淋巴囊上皮细胞的作用奠定了实验方法基础,提供了较理想的离体实验模型。经转染、酶切、标记不同亚基Na+,K+-ATP酶探针,采用豚鼠内淋巴囊冰冻切片、原位杂交的方法检测不同亚基Na+,K+-ATP酶mRNA在内淋巴囊上皮细胞的表达。结果α1β2,Na+,K+-ATP酶在内淋巴囊上皮细胞的表达量较多,α1β1构型其次。而结肠上皮和肾小管上皮中的Na+,K+-ATP酶几乎仅仅由α1β1构成。Na+,K+-ATP酶的构型不同表明它们的离子主动转运过程可能不同。多种亚基异构体组成的Na+,K+-ATP酶在内淋巴囊上皮细胞的表达,不仅表明内淋巴囊是离子和液体交换的场所,而且由α和β亚基的多种异构体组成的Na+,K+-ATP酶共存于一个细胞,如一个(αβ)2四元构型的Na+,K+-ATP酶的存在,可更有效地发挥其功能的多样性。 查阅Gene bankTM,采用Motif程序,分析各物种(小鼠、蟾蜍、人类等)HA合成酶的保守序列,自行设计并合成了HA合成酶的寡聚核苷酸探针,并采用寡聚核苷酸探针原位杂交技术检测了豚鼠内淋巴囊和肾小管上皮细胞HA合成酶mRNA的表达,结果在内淋巴囊近侧端、中间部和
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