青蒿bZIP类转录因子AaABF3的克隆及功能分析

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青蒿是起源于中国的传统药用植物,青蒿素是特异性存在于青蒿分泌性腺毛中的一种倍半萜内酯类化合物,以青蒿素为基础的青蒿素联合疗法被世界卫生组织认定为最有效的抗疟疗法。然而,野生青蒿植株中青蒿素含量很低,仅占叶片干重的0.1%-1%,早期的研究表明,植物激素脱落酸(ABA)在提高青蒿素含量方面发挥着重要作用,但ABA如何调节青蒿素的生物合成尚不清楚。bZIP(Basic Leucin Zipper)类转录因子参与了ABA依赖性基因表达途径的转录调控。因此,为了探究ABA调控青蒿素合成途径的分子机制,本研究分离了一个bZIP类转录因子AaABF3,得到的主要研究结果如下:1.克隆了AaABF3转录因子,生物信息学分析表明该基因全长1149bp,编码382个氨基酸。通过GUS染色与实时荧光定量PCR分析了AaABF3的表达模式,发现该基因在青蒿腺毛中优势表达,并受到ABA的诱导。AaABF3蛋白的亚细胞定位实验发现AaABF3定位在细胞核中。2.双荧光素酶检测实验表明,AaABF3能激活青蒿素合成途径结构酶基因ALDH1的表达,酵母单杂交实验及凝胶迁移实验验证了AaABF3能直接结合ALDH1的启动子,从而参与调控青蒿素合成。3.获得了AaABF3过表达与RNA干扰的转基因青蒿植株,高效液相色谱法分析结果表明AaABF3能够促进青蒿素的合成。通过检测转基因青蒿植株中AaABF3与ALDH1对ABA的响应,验证了ABA通过AaABF3调控青蒿素的合成。通过对转基因植物进行干旱处理,推测AaABF3可能参与了青蒿的抗旱调控。
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