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PI3K/AKT信号通路的激活可保护细胞免受外来刺激以维持机体稳态的构建。ARC(apoptosis repressor with a caspase recruitment domain)是目前唯一一个已知的具有抗内源性以及外源性凋亡的蛋白,机体受不利因素刺激时其表达量增高;ARC蛋白的活化为高度分化的心肌,骨骼肌等终末细胞以及肿瘤细胞提供保护。目前,ARC发挥其保护作用的信号转导机理仍然不清楚;PI3K/AKT信号通路是否介导ARC发挥其生物学效应尚未有文献报道,其相关作用机理有待进一步研究。通过体外培养原代鸡胚心肌细胞,Hela以及293T细胞系;选择不同浓度H2O2作用于三种细胞以建立体外氧化损伤模型;运用基因工程技术构建真核表达质粒P-IRES2-ARC-EGFP;转染该质粒于原代鸡胚心肌细胞、Hela以及293T细胞;运用CCK-8法以及PI染色法评估细胞活力以证实ARC的过表达是否保护细胞免受氧化损伤;Western blot检测ARC、P-AKT以及P53蛋白的表达;Real-Time PCR半定量PI3K、AKT以及P53基因的相对表达量;以此鉴定细胞氧化损伤模型下PI3K/AKT信号通路的激活以及相关基因的作用关系。应用PI3K阻断剂LY294002抑制PI3K/AKT信号通路的激活证明在细胞氧化损伤模型下PI3K/AKT信号通路是否介导ARC保护细胞氧化损伤。结果显示:原代鸡胚心肌细胞、Hela细胞氧化损伤模型下PI3K以及AKT基因以及P-AKT蛋白呈现高表达;但293T细胞P-AKT蛋白表达量不变;证明在原代鸡胚心肌细胞、Hela细胞氧化损伤模型下PI3K/AKT信号通路的激活;抑制该信号通路明显降低原代鸡胚心肌细胞、Hela细胞活力;Hela以及293T细胞过表达ARC为其提供保护;但ARC的过表达未能保护原代鸡胚心肌细胞氧化损伤;LY294002抑制PI3K/AKT信号通路的同时,ARC为Hela细胞提供保护;在293T细胞氧化损伤模型下,P53蛋白以依赖于H2O2作用剂量以及时间的形式呈现高表达,ARC过表达抑制293T细胞活力的下降。综合以上结果得出:在氧化损伤模型下,ARC蛋白过表达或者PI3K/AKT的激活可提供保护;ARC发挥其生物学效应不依赖于PI3K/AKT信号通路的激活。本实验推测293T细胞过表达ARC抵抗氧化损伤可能是由于ARC发挥内源性抗凋亡功能从而抑制P53所启动的内源性凋亡途径。