论文部分内容阅读
栓皮栎(Quercus variabilis Blume.)是我国重要的落叶阔叶树种。栓皮栎常规的繁殖方式是有性繁殖,由于其种子不耐储藏,结实期晚,扦插繁殖困难,产量低,轮回期长,生根困难,目前主要依靠天然更新。由于生理老化和通过器官发生再生植株较困难等,造成栓皮栎基因资源保存、快繁和遗传改良难度大。体细胞胚胎发生生物技术为林木种质保存、快速繁殖性状优良的植株和遗传改良提供了新途径。虽然目前已获得了栓皮栎体胚再生植株,但转株率较低,所以这一繁殖系统应用于林木改良仍有一定的难度。本文通过比较栓皮栎体胚和种胚发生过程中糖含量、可溶性淀粉含量、储藏蛋白含量的差异;并对体胚与种胚的储藏蛋白特性进行分析,以期为改良栓皮栎体胚再生植株培养方案提供依据。主要结果如下:1.栓皮栎种胚到发育后期可溶性糖含量和还原糖含量积累达到最大,而且主要集中在胚部分。体胚在球形期含量高,心形期达到低谷,之后又不断的上升,在子叶期含量达到最大值。培养基中添加200mg/L水解酪蛋白和400mg/L谷氨酰胺的含量要高于其它处理。2.栓皮栎种胚可溶性淀粉含量主要集中在子叶部分。体胚在球形期含量最高,心形期最低,鱼雷期升高,子叶期呈下降趋势。培养基中添加400mg/L谷氨酰胺的处理比其它处理在整个积累过程中含量一直都大。3.栓皮栎种胚蛋白质主要集中在胚部分。成熟种胚中四种储藏蛋白质的含量由高到低顺序为:谷蛋白>球蛋白>清蛋白>醇溶蛋白。体胚在球形期含量较低,心形期达到最高,鱼雷期开始下降,子叶期仍然降低。培养基中添加200mg/L水解酪蛋白和400mg/L谷氨酰胺处理的可溶性蛋白质含量高于其它处理。4.蛋白凝胶电泳结果显示种胚在发育的早期,首先出现98KD的条带,且随发育时期,带的颜色逐渐加深。在随后的发育中,35-55KD出现了几条新带。在发育的后期,100,63,42.5,35,24,15KD六条带随发育时间的延长呈逐渐加深的趋势。种胚中清蛋白和球蛋白在种子储藏蛋白中含量丰富,其电泳图谱也反映出清蛋白和球蛋白具有较好的多态性,另外球蛋白在97.40 KD,110.79 KD,130.34 KD有3条大分子量的条带。在体胚发育的不同时期,球形期条带较多,到心形期时总条带数有所减少。鱼雷期时出现三条新带。在子叶期时总的条带数和鱼雷期,但一些条带发生了变化,在14.4 KD的条带消失,在17.75 KD出现两条新带。不同处理在栓皮栎体胚发育蛋白质谱型未发现明显差异。