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采用多变量形态度量学方法,运用贝壳重量和可测量尺寸指标对中国沿海脉红螺Rapana venosa(Valenciennes,1846)的秦皇岛、大连、丹东、烟台、青岛、日照、连云港和舟山8个自然居群形态变异进行了比较研究,建立了各居群形态聚类图和形态判别函数。结果显示中国沿海脉红螺8个居群依据形态可分为与其生态相关的两大类群,即内湾近岸类群和外海栖居类群。第一类群包括秦皇岛、丹东、烟台、青岛4个居群;第二类群包括大连、连云港和舟山3个居群。 采用淀粉凝胶水平电泳法研究了秦皇岛、大连、丹东、烟台、青岛、连云港和舟山7个自然居群的遗传多样性。共检测了14种等位酶(G3PD、SDH、MDH、ME、IDH、XDH、CAT、SOD、HK、EST、ALP、AP、MPI、PGM)的22个基因位点,其中11种等位酶的G3PD*、SDH-2*、MDH-1*、ME-2*、IDH*、XDH*、CAT*、SOD-1*、SOD-2*、EST-2*、MPI*以及PGM-3*共12个位点为多态位点。群体平均多态位点比例P=0.37660.99。平均每个位点的有效等位基因数为(?)e=1.1727±0.0353;平均每个位点杂合子期望值He=0.0808±0.0188;平均每个位点杂合子观测值(?)o=0.0440±0.0127;Nei’s遗传相似度(I)和遗传距离(D)分别在0.9899~0.9989和0.0016~0.0191范围内波动,平均为0.9909和0.0117。根据Nei的判定标准,中国沿海脉红螺7个居群尚不构成亚种和不同的种类,其差异属于地方居群间差异。 对秦皇岛、大连、丹东、烟台、青岛、连云港和舟山7个自然居群脉红螺的线粒体DNA 16S rRNA基因片段进行了扩增和测序,分析了102个个体511bp的碱基序列,结果显示:各居群的基因片段序列中A+T含量为56.74%~57.12%。没有发现插入/缺失突变的核苷酸位点。检测到了28个多态性核苷酸位点,共37种单倍型。单倍型1的同源性达到58.7%。 大连居群的281(G→A)和483(T→C)位点,烟台居群的17(A→G)位点,中国沿海脉红螺遗传多样性研究66(T一C)和247(TC)位点,舟山居群的128(T一C)位点,秦皇岛居群130(T一G)和161(AG)位点以及丹东居群431(T一C)位点变异的可以作为区分居群的分子遗传标记位点。青岛和连云港两个居群没有检测到可作为遗传标记的特征突变位点。 居群内,烟台和大连居群是核昔酸差异数K以及平均核普酸多样性指数Pi最高的两个居群,其K值和Pi值分别为一,952,1 .44和0.00382,0.00341;青岛最低,为0.654和0,00128。 居群间,大连居群在居群间核昔酸差异数K,居群间平均每位点核昔酸替代数DxY和居群间每位点净核普酸替代数Da三个指标上都表现出比其它居群之间较高的水平。 分属于7个自然居群的102个个体在分子系统树中没有明显的聚类,说明脉红螺的不同居群间没有出现明显的遗传分化。 对上述7个自然居群的线粒体DNA COI基因片段进行了扩增和测序,分析了656bp的碱基序列及其编码的218个氨基酸序列。结果显示:各居群的基因片段序列中A十T含量为63.8%64.0%,7个自然群体间碱基片段序列差异不显著。氨基酸序列中,亮氨酸(Leu)含量最高,为17.94%,其次为甘氨酸(Gly)和丙氨酸(Ala),含量分别为10.55%和9.63%,脉红螺COI基因不编码半肤氨酸(Cys)。3个氨基酸密码子位点pos#l、pos#2、pos#3中,碱基T的含量均为最高,依次为Pos#2(46.5%)>Pos#l(42.9%)>Pos#3(26.6%)。 碱基序列没有发现插入/缺失突变的核昔酸位点。共检测到了35个多态性核普酸位点,共33种单倍型;大连居群的222(C一G)和261(C一T)位点,烟台居群的279(T一C)位点,舟山居群的536536(A一C)位点的变异可以作为区分居群的分子遗传标记位点。 7个自然居群的71个个体在分子系统树中也没有明显的聚类,与165 rRNA基因片段结果相近,说明脉红螺的不同居群间没有出现明显的遗传分化。 氨基酸序列共有7个变异位点,8个单倍型氨基酸序列,5个氨基酸突变位中国沿海脉红螺遗传多样性研究点分别为组氨酸(H)、亮氨酸(L)、丝氨酸(S)、蛋氨酸(M)和苯丙氨酸(F)。变异位点主要集中在大连居群。 大连居群的核营酸多样性指数Pi最高,为0.00697,丹东居群最低,为0.11203。大连居群在K,DxY和Da指标上都表现出比其它居群之间较高的水平。165 rRNA基因片段和COI基因片段结果一致,说明大连居群具有最为丰富的遗传多样性和丰富的遗传背景。 利用线粒体DNA 1 6SrRNA基因片段,对中国沿海3个目8个科14种腹足类的系统演化进行了分析。分析了507bP的同源碱基序列,计算了d距离和r距离,并用4种方法构建了系统树。结果显示:脉红螺在分析的14种腹足类种属于相当进化的种类,分析结果从分子遗传层次不支持脉红螺与红螺属于同一个种类的说法。