本实验的目的是研究。PEDLLA-FG020326药效学的改变及可能机制。 方法与结果: 1.PEDLLA-FG020326和FG020326体外逆转MDR活性的比较KBv200细胞为过度表达P-gp的具有典型MDR表型的人口底癌耐药细胞株，KB细胞为其敏感株。KBv200较KB细胞对VCR耐药约99倍，对Dox耐药约16倍。 本课题通过MTT法比较PEDLLA-FG020326和FG020326对KB及KBv200细胞对抗癌药物长春新碱(VCR)和阿霉素(Dox)敏感性的影响。结果显示PEDLLA-FG020326、FG020326及PEDLLA在50μmol/L时对KBv200和KB细胞均无明显的细胞毒作用。PEDLLA-FG020326与FG020326相比，能显著增加VCR或Dox对KBv200耐药细胞株的细胞毒作用，对VCR逆转倍数分别为56.4和35.9倍，对Dox的逆转倍数分别为14.98和7.64倍。但这两种化合物均不能增加敏感株细胞对抗癌药物的敏感性，表明这种增敏作用是逆转作用。空载体PEDLLA无逆转MDR活性，说明PEDLLA-FG020326增强的逆转活性不是由于空载体内在的细胞毒性或者化疗增敏性引起的。 2．PEDLLA-FG020326和FG020326体内逆转MDR的活性比较PEDLLA-FG020326比FG020326具有更好的体外逆转活性，为了研究体内PEDLLA-FG020326是否也能够提高FG020326的药效动力学，用KBv200细胞裸鼠移植瘤模型进行抑瘤实验研究。设生理盐水对照组，VCR单独给药组(0.2 mg/kg，i.p，q2d)，PEDLLA-FG020326单独给药组(50 mg/kg，i.P，q2d)，FG020326(50 mg/kg，i.p，q2d)+VCR(0.2 mg/kg，i.p，q2d)联合用药组以及PEDLLA-FG020326(50 mg/kg，i.p，q2d)+VCR(0.2 mg/kg，i.p，q2d)联合用药组。结果显示单独应用PEDLLA-FG020326或VCR均不能抑制肿瘤的生长，而VCR与FG020326或PEDLLA-FG020326联合用药组与生理盐水对照组相比，对肿瘤生长有较明显的抑制作用，并且PEDLLA-FG020326与VCR联合用药组比FG020326与VCR联合用药组对肿瘤生长的抑制作用更为显著，抑瘤率分别为50.5﹪和31.2﹪，提示PEDLLA-FG020326和FG020326相比，体内也具有更强的逆转活性，并且联合用药组实验动物的体重与对照组相比没有明显的下降。 3．FG020326及PEDLLA-FG020326逆转MDR机理的比较关于逆转机理的研究很多。不同的逆转剂，其逆转机理不同；同一逆转剂则可能拥有多种不同的逆转机理；同一逆转剂的不同剂量形式其逆转机理可能也存在量和质的差别。体外和体内实验均显示PEDLLA-FG020326比FG020326具有更强的逆转活性，因此本文也从体外和体内两方面来初步研究其逆转机理的不同。 体外实验主要比较肿瘤细胞中Dox的积累量及泵出量，P-gp功能受抑制的强弱；体内主要比较耐药细胞裸鼠移植瘤肿瘤组织中阿霉素积累量的差异。 3.1 PEDLLA-FG020326和FG020326对MDR肿瘤细胞内DOX积累及泵出的影响以荧光分光光度计法测定肿瘤细胞内抗癌药物Dox的积累量。结果显示，KB细胞内Dox的积累量为KBv200细胞的12倍，提示Dox在KBy200细胞中的积累量远低于其相应的敏感株KB细胞。PEDLLA-FG020326和FG020326呈浓度依赖性地增加KBv200细胞中Dox的积累量。相同浓度时，PEDLLA-FG020326比FG020326能显著增加KBv200细胞内Dox的积累量(P<0.05)。PEDLLA对KBv200细胞中Dox的积累量无明显影响。 泵出实验结果显示，在相同的时间点，KBv200细胞比KB细胞能释放更高比例的Dox。在60 min时有70﹪的Dox从KBy200细胞中释放出来，而在KB细胞中只有40﹪。对KBv200细胞而言，PEDLLA-FG020326与FG020326相比，能更有效地抑制Dox的泵出，但两者对KB细胞无明显影响。PEDLLA不影响KBy200及KB细胞中Dox的泵出。PEDLLA-FG020326、FG020326及PEDLLA对KB细胞内Dox的泵出无明显影响。 本实验结果提示，PEDLLA-FG020326比FG020326能增加耐药肿瘤细胞中Dox的积累和延缓耐药细胞中Dox的泵出。 3.2 PEDLLA-FG020326和FG020326对P-gp功能的影响罗丹明是P-gp特异性的荧光底物，罗丹明实验是检测P-gp功能的经典实验方法。细胞内罗丹明积累量越多提示P-gp功能越弱，反之，P-gp功能越强。本课题采用流式细胞仪法检测各处理组肿瘤细胞内罗丹明积累量的变化。结果表明，耐药株KBv200细胞中的罗丹明积累量明显低于其敏感株KB细胞。PEDLLA-FG020326和：FG020326呈浓度依赖性地增加KBv200细胞内罗丹明的积累量。相同浓度时，PEDLLA-FG020326比FG020326能显著增加KBv200细胞内罗丹明的积累量(P<0.05)。PEDLLA对KBv200细胞内罗丹明的积累无明显影响。 本实验结果提示，PEDLLA-FG020326比FG020326能更好地抑制P-gP的功能，发挥更好的逆转MDR效果。 3.3 PEDLLA-FG020326和FG020326对裸鼠移植瘤组织中Dox积累的测定选用KBv200和KB细胞裸鼠移植瘤为模型，用反相高效液相色谱法(reversephase high-performance liquid chromatography，RP-HPLC)测定了敏感株KB细胞和耐药株KBv200细胞肿瘤组织中Dox的积累量，并比较了PEDLLA-FG020326和FG020326对耐药细胞肿瘤组织中Dox积累的影响。设生理盐水组，Dox(8mg/kg)单独用药组，FG020326(50 mg/kg)和Dox(8 mg/kg)联合用药组，PEDLLA-FG020326(50 mg/kg)和Dox(8 mg/kg)联合用药组及PEDLLA(50mg/kg)和Dox(8 mg/kg)联合用药组。FG020326、PEDLLA-FG020326或PEDLLA于Dox尾静脉注射前3 h腹腔注射，在预定的三个时间点(Dox尾静脉注射后第1、3、5h)取肿瘤组织测定。结果显示，在相同的时间点，敏感株KB细胞对照组肿瘤组织中Dox含量明显高于耐药株KBv200细胞对照组中Dox含量(P<0.05)；耐药株FG020326或PEDLLA-FG020326处理组肿瘤组织中Dox含量均高于相应时间点的对照组，并且PEDLLA-FG020326处理组肿瘤组织中Dox含量高于FG020326处理组，PEDLLA对耐药株肿瘤组织中Dox的积累无明显影响。本实验结果提示，与FG020326相比，PEDLLA-FG020326有可能增加耐药细胞肿瘤组织中抗癌药物的积累。 结论: 1．PEDLLA-FG020326和FG020326均具有较强的体内外逆转MDR的活性，但PEDLLA-FG020326的逆转效果优于FG020326。 2．体外实验中，PEDLLA-FG020326比FG020326具有更强的促进耐药肿瘤细胞内抗癌药物的积累、延缓抗癌药物的泵出以及抑制P-gP功能的作用。 3．和FG020326相比，PEDLLA-FG020326可能增加耐药细胞肿瘤组织中抗癌药物的积累。 4．本研究结果表明，PEDLLA-FG020326能够提高FG020326的药效学，增强其逆转活性。这为FG020326和抗癌药物合用克服MDR提供了一个可供选择的药物剂型。