论文部分内容阅读
ZBTB蛋白家族是一类含有BTB/POZ结构域和C2H2Küppel锌指基序的DNA结合蛋白,具有基因转录调节功能,在细胞增殖、分化、凋亡和功能调节等生物学过程中发挥重要作用。本实验室通过RT-PCR技术克隆获得了一个ZBTB家族成员ZBTB1(NM001123329.1)。实验室前期研究表明ZBTB1位于14号染色体上,定位在14q23.3,含有2142bp的开放式阅读框,编码一个713个氨基酸组成的蛋白质。同源性分析显示,ZBTB1的N端BTB/POZ结构域和C端C2H2型ZNF结构域与其他锌指蛋白家族成员有较高的同源性。亚细胞定位分析显示ZBTB1定位于细胞核,且呈斑点状分布。蛋白质间的相互作用存在于机体每个细胞的生命活动中,绝大多数生命活动都是通过蛋白间的相互作用来实现的。对生命活动中的蛋白质间相互作用的研究有助于我们解决许多生命研究中的关键问题。我们通过酵母双杂交技术(yeast twohybrid)从人胎脑文库中筛选与ZBTB1相互作用的蛋白质,经测序整理后获得了23种与ZBTB1存在互作的新蛋白,并对其中一种蛋白MAPT进行了后续验证研究。我们成功的构建出了pCMV-HA-ZBTB1、pCMV-Myc-MAPT重组载体,并在哺乳动物细胞中有效表达。经过免疫共沉淀实验验证,在293T细胞中ZBTB1和MAPT存在蛋白间的相互作用。我们的实验验证了两种蛋白的互作。同时,基于实验室的另一个研究方向,我们进行病例-对照研究分析了基因组中相关基因的插入缺失多态性与疾病的相关性。通过阅读文献,我们选取RTN4基因上CAA(rs34917480)插入/缺失多态性与肺癌的易感性进行了研究。CAA插入/缺失多态性位点位于RTN4基因的3’端非编码区域。为了研究此多态性与肺癌易感性的关系,我们收集了411例肺癌患者血液样本和478例正常人血液样本进行研究。所有样本经过PCR-聚丙烯酰胺凝胶电泳后统计基因分型。经过统计学分析显示CAA插入/缺失多态性在两组样本中具有显著差异(OR=1.375,95%C.I.=1.118-1.691),P<0.01。分析结果显示RTN4基因上CAA插入/缺失的多态性与肺癌具有相关性,且这个位点的缺失会增大患肺癌的风险。