Cur/GNRs-BSA纳米粒的制备及联合近红外光热治疗乳腺癌MCF-7细胞的实验研究

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乳腺癌是发生在乳腺癌上皮组织的恶性肿瘤,是女性常见的恶性肿瘤之一,发病率占全身各种恶性肿瘤7-10%,发病率常与遗传有关,是一种严重影响妇女身心健康甚至危及生命的最常见的恶性肿瘤之一。随着如今治疗理念的转变与更新,乳腺癌的治疗进入了综合治疗时代,形成了乳腺癌局部治疗与全身治疗并重的治疗模式。根据肿瘤分期和患者的状况,酌情采用手术、放疗、化疗、内分泌治疗、生物靶向治疗及中医药辅助治疗等多种手段。而通常为了“以防后患”,乳腺癌患者面临的治疗是切除乳房,这将导致女性的性征丧失,而且手术后的放疗、化疗等的副作用,也会给其身体带来伤害,使患者处于对癌症的恐惧及对生命的担忧中,精神上承受了巨大的痛苦及压力。因此需要寻找新的更加有效的治疗方法。目前纳米材料被研究用于医学治疗方面越来越受到关注,其中,纳米金棒作为热疗用的光敏感剂,可吸收近红外光(near-infrared, NIR)能量,迅速升温,也越来越受到学术界广泛关注。本论文将研究制备纳米材料与传统中药成分结合形成的Cur/GNRs-BSA复合纳米粒子应用于乳腺癌的治疗,主要研究内容如下:第一部分GNRs和GNRs-BSA纳米粒的制备、表征及其热动力学研究[目的]①制备表征GNRs纳米粒,用白蛋白修饰GNRs纳米粒并表征。②GNRs-BSA纳米粒热动力学研究。[方法]①采用无种子生成法制备GNRs纳米粒,再用去溶剂-交联法用牛血清白蛋白(BSA)对其进行表面修饰制备GNRs-BSA纳米粒。②采用透射电镜(transmission electron microscope,TEM),紫外分光光度计,ZETA SIZER3000激光粒度分析仪等技术对修饰前后纳米粒进行表征。③将修饰后的GNRs-BSA纳米粒在NIR作用下观察不同浓度的GNRs-BSA纳米粒的体外升温情况。[结果]①制备的GNRs和GNRs-BSA纳米粒表征:TEM检测显示GNRs纳米粒为棒状,合成的GNRs长为60到70nm,宽约为10nm,长径比为3-4,形态稳定,分散系数良好,状态均一:修饰过的GNRs-BSA纳米粒近似圆形,大小较为一致,呈散在分布或聚集成片。激光粒度分析仪显示GN Rs呈双峰形,GNRs-BSA纳米粒呈单峰形,平均直径为149.7nm;在PH7.4中性环境中,GNRs纳米粒的ZETA电位值为42.43±0.74mV,而GNRs-BSA纳米粒的zeta电位值为-39.83±0.29mV;GNRs纳米粒的紫外吸收光谱在508nm和814nm处分别有两个明显的吸收峰。②自制备的GNRs-BSA纳米粒热动力学特征:将不同浓度的GNRs-BSA纳米粒在同样室温中放置在功率2.5W的波长808nm近红外光照射下,温度可以上升达39.1℃-47.8℃不等,前15min内升温迅速,40min后温度几乎不再上升而恒定在某一水平,说明其升温能力与GNRs浓度呈正相关。[结论]①应用无种子生成法成功制备了GNRs纳米粒,且BSA成功地包覆于GNRs纳米粒形成纳米球。②修饰后自制备的GNRs具有良好的光学性质,修饰后的GNRs-BSA-NPs也具有吸收光能而升温并达到恒温的能力,可用于肿瘤的近红外热疗。第二部分Cur/GNRs-BSA-NPs的制备、表征及特性检测[目的]①制备Cur-BSA纳米粒和Cur/GNRs-BSA纳米粒并表征;②Cur/GNRs-BSA纳米粒热动力学及生物相容性研究。[方法]①采用溶剂-交联法制备Cur-BSA纳米粒和Cur/GNRs-BSA纳米粒。②采用透射电镜(transmission electron microscope, TEM)、ZETA SIZER3000激光粒度分析仪对纳米粒进行表征。③将Cur/GNRs-BSA纳米粒在NIR作用下观察不同浓度Cur/GNRs-BSA纳米粒的体外升温情况。④采用CCK-8法检测(NRs-BSA-NPS、Cur-BSA-NPs、Cur/GNRs-BSA-NPs 体外细胞毒性。[结果]①制备的Cur-BSA纳米粒和Cur/GNRs-BSA纳米粒表征:TEM检测显示Cur-BSA纳米粒为圆形,形态稳定,分散良好,大小均一;Cur/GNRs-BSA纳米粒近似圆形,大小较为一致,呈散在分布或聚集成片。激光粒度分析仪显示Cur-BSA-NPs呈单峰形,平均直径为139.7nm; Cur/GNRs-BSA-NPs呈单峰形,平均直径为190.1nm;在PH7.4中性环境中,Cur-BSA-NPs的zeta电位值为-44.87±1.12mV,而Cur/GNRs-BSA纳米粒的zeta电位值为-37.27±0.52mV.②自制备的Cur/GNRs-BSA纳米粒热动力学特征:将不同浓度的Cur/GNRs-BSA纳米粒在同样室温中放置在功率2.5W的波长808nm近红外光照射下,温度可以上升达38℃2-49℃不等,前15min内升温迅速,40min后温度几乎不再上升而恒定在某一水平,其升温能力与Cur/GNRs-BSA-NPs浓度呈正相关,③CCK-8试验表明白蛋白修饰后的Cur-BSA-NPs、GNRs-BSA-NPs、Cur/GNRs-BSA-NPs 对 L929细胞没有明显的毒副作用,毒性被列为1级。[结论]①应用去溶剂-交联法已成功制备了Cur-BS A纳米粒和Cur/GNRs-BSA纳米粒。②Cur/GNRs-BSA纳米粒溶液在近红外光作用下随着浓度的上升,温度也相应升高,可用于肿瘤的近红外热疗。③自制备的各组白蛋白纳米粒具有良好的相容性和安全性。第三部分Cur/GNRs-BSA-NPs结合近红外光对人乳腺癌细胞MCF-7细胞的治疗效果及其机制的研究[目的]研究Cur/GNRs-BSA纳米粒在近红外光下对乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用。[方法]通过CCK-8试验评价Cur/GNRs-BSA纳米粒联合热疗对体外培养人乳腺癌MCF-7细胞的治疗作用,并采用estern blotting方法初步探讨其抗乳腺癌作用机制。[结果]CCK-8试验结果显示Cur/GNRs-BSA纳米粒组抑制人乳腺癌MCF-7细胞的增殖能力高于单Cur-BSA纳米粒组和GNRs-BSA纳米粒组;Western blot结果表明Cur/GNRs-BSA纳米粒姜黄素联合热疗可以引起凋亡细胞的相关蛋白P53、细胞色素C、caspase 3表达上升。[结论]Cur/GNRs-BSA纳米粒近红外光治疗人乳腺癌细胞MCF-7细胞的效果优于单独升温和单纯药物组,这种疗法光热疗法结合了中医中药学,西医生物材料学和光动力疗法,体现了中西医结合治疗肿瘤的综合疗法。
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