6-OHDA诱导的帕金森病大鼠视网膜多巴胺神经元变化与镁离子关系的研究

来源 :福建医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hwj67712233
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目的:探究6-OHDA诱导的帕金森病大鼠视网膜多巴胺神经元的变化与镁离子以及镁离子转运体之间的关系。方法:1.单点注射6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)至右侧内侧前脑束(Medial forebrain bundle,MFB)建立帕金森病(Parkinson’s Disease,PD)大鼠模型,将大鼠分为4组:对照组(Cont)、对照补镁组(Cont+Mg)、帕金森病模型组(PD)、帕金森病补镁组(PD+Mg)。于术后30min腹腔注射硫酸镁,并分别持续2W和4W。2.建模后每隔2W腹腔注射阿朴吗啡(Apomorphine,APO)进行诱导旋转实验,观察大鼠行为学变化,并通过旷场实验观察大鼠心理焦虑程度。3.免疫荧光染色观察视网膜多巴胺神经元的变化[酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase,TH)阳性细胞荧光强度]。4.颈静脉采血,全自动生化分析仪监测大鼠术前1d及术后4W内血清镁离子含量的变化。5.镁离子试剂盒检测大鼠视网膜、纹状体组织镁离子含量。6.实时荧光定量PCR(Quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR)检测大鼠视网膜镁离子转运体CNNM2、SLC41A1、Mag T1 mRNA水平表达情况。7.Western blot检测大鼠视网膜镁离子转运体CNNM2、SLC41A1、Mag T1蛋白水平表达情况。结果:1.APO诱导的行为学结果显示,建模后2W和4W,PD组大鼠的旋转圈数均较相应的对照组显著增加(p<0.01);建模4W后,PD+Mg组大鼠旋转圈数较PD组大鼠显著降低(p<0.01),同时与建模2W后PD+Mg组大鼠相比也明显降低(p<0.01)。2.旷场实验结果显示,建模4W后,PD组大鼠实验总路程及中央活动时间较Cont组均明显下降(p<0.05),同时,PD+Mg组中央活动路程较PD组上升(p<0.05)。3.免疫荧光染色结果显示,建模2W和4W后,PD组大鼠左侧(毁损对侧)视网膜TH荧光强度较Cont组相应侧均降低(p<0.05),PD+Mg组大鼠左侧视网膜TH荧光强度较PD组相应侧均上升(2W:p<0.01;4W:p<0.05),此外建模2W后,PD+Mg组大鼠右侧(毁损侧)视网膜TH荧光强度较PD组相应侧上升(p<0.05)。4.(1)血清镁离子浓度的结果显示,PD组大鼠术后第1、2、7d血清Mg2+含量较Cont组均明显降低(p<0.05),术前1d、术后4d、14d,各组血清Mg2+含量在统计学上无显著差异。术后第28d时,PD+Mg组大鼠血清Mg2+含量较PD组降低(p<0.05),Cont+Mg组大鼠血清Mg2+含量较Cont组降低(p<0.05)。(2)视网膜镁离子浓度结果显示,建模2W后,PD组大鼠左侧(毁损对侧)视网膜Mg2+含量较Cont组相应侧显著下降(p<0.01),其余各组在统计学上无显著差异。建模4W后,PD+Mg组大鼠右侧(毁损侧)视网膜Mg2+含量较PD组相应侧上升,其余各组Mg2+含量无统计学差异。(3)纹状体镁离子浓度结果显示,建模2W后,PD组大鼠右侧纹状体(毁损侧)Mg2+含量较Cont组相应侧明显降低(p<0.05),PD+Mg组与PD组之间Mg2+含量无统计学差异;建模4W后,PD组大鼠双侧纹状体Mg2+含量较Cont组均明显下降(p<0.05),PD+Mg组与PD组之间Mg2+含量无统计学差异。5.qRT-PCR结果显示,建模2W后,PD组大鼠右侧(毁损侧)视网膜CNNM2mRNA表达水平较Cont组相应侧降低(p<0.01),而PD+Mg组右侧视网膜CNNM2 mRNA表达较PD组相应侧升高(p<0.05)。各组大鼠Mag T1与SLC41A1mRNA表达水平在统计学上无显著性差异。建模4W后,各组大鼠Mag T1、SLC41A1及CNNM2 mRNA表达水平在统计学上无显著差异。6.免疫印迹实验(Western blot)显示,建模2W后,PD组大鼠左侧(毁损对侧)视网膜Mag T1、SLC41A1及CNNM2蛋白较Cont组相应侧明显下调(p<0.05);同时,PD+Mg组大鼠左侧视网膜Mag T1及SLC41A1蛋白较PD组相应侧上调(p<0.05);此外Cont+Mg组大鼠右侧(毁损侧)视网膜SLC41A1蛋白表达量较Cont组相应侧降低(p<0.01)。建模4W后,PD组、PD+Mg组大鼠双侧视网膜SLC41A1蛋白均较Cont组、Cont+Mg组相应侧显著下调(p<0.01),Mag T1与CNNM2蛋白各组之间表达水平无统计学意义。结论:1.6-OHDA诱导的单侧PD模型大鼠主要毁损对侧视网膜多巴胺神经元,补充MgSO4可改善PD大鼠的运动症状,同时对于PD大鼠视网膜多巴胺神经元具有一定的保护作用。2.6-OHDA可下调PD大鼠视网膜Mag T1、SLC41A1与CNNM2蛋白表达,补充MgSO4可一定程度上调蛋白表达。3.6-OHDA可导致PD大鼠视网膜与纹状体Mg2+浓度降低,但对血清Mg2+影响尚无明确结论,有待进一步探究。
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