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能量负平衡是奶牛酮病发生的基础,低血糖、高酮体是其特征,瘦蛋白(LP)、神经肽Y(NPY)、高血糖素(GLN)、胰岛素(INS)、胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)等是调节体内糖代谢的主要神经内分泌因子。本研究通过体外牛肝细胞原代培养实验和酮病病牛与健康牛的体内实验,运用荧光定量逆转录PCR(RT-PCR)方法,探讨了能量代谢相关因子对奶牛肝糖异生的调控作用。在体外牛肝细胞原代培养实验中,往体外培养的犊牛肝细胞中添加不同浓度的上述神经内分泌因子,检测其丙酮酸羧化酶(pyruvate carboxylase,PC)和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)基因表达及其活性。结果表明,培养液中添加LP、INS和IGF-Ⅰ显著下调了PC和PEPCKR的基因表达及活性(p<0.05),而添加NPY和GLN则显著上调了PC和PEPCK的基因表达及活性(p<0.05)。体内实验中,选择产奶量、分娩日期相近的酮病病牛和健康牛各5头做对照试验,检测其循环血液神经内分泌因子含量和肝组织的PC mRNA和PEPCK mRNA的丰度及其活性,并分析它们与神经内分泌因子含量的相关性。结果表明,病牛与健康牛之间的PC与PEPCK的基因表达及活性差异显著,酮病病牛的肝糖异生能力得到了加强(p<0.05);酮病病牛肝组织中的PC活性与循环血液中的GLU、LP、NPY含量呈正相关,其中与LP相关性显著(p<0.05),与GLU、NPY相关性极显著(p<0.01);PC活性与GLN、INS含量呈负相关,但相关性不显著。酮病病牛肝组织中的PEPCK活性与循环血液中的GLU、LP、NPY含量呈正相关,其中与GLU相关性显著(p<0.05),与NPY相关性极显著(p<0.01);PEPCK活性与GLN、INS含量呈负相关,但相关性不显著。酮病病牛肝组织中的PC基因表达与循环血液中的GLU、LP、NPY、GLN含量呈负相关,其中与GLU、NPY相关性极显著(p<0.01);与INS含量呈正相关,但相关性不显著。酮病病牛肝组织中的PEPCK基因表达与循环血液中的GLU、LP、NPY含量呈负相关,且相关性极显著(p<0.01);与GLN、INS含量呈负相关,其中与INS含量相关性显著(p<0.05)。