2003年4月，人们确定了引起重症急性呼吸综合征(Severe acute respiratory syndrome，SARS)的病原体是SARS冠状病毒(SARS-CoV)。冠状病毒利用Spike蛋白与靶细胞表面的特异受体血管紧张素转换酶2(angiotensin-convertingenzyme2，ACE2)结合后，与靶细胞融合从而进入细胞引起感染。本论文主要通过RT-PCR的方法从SARS-CoV敏感的Vero E6细胞中扩增出ACE2全长基因(veroACE2)，对其进行测序列分析、原核表达、并制备了多克隆抗体，进一步建立了稳定表达veroACE2的昆虫细胞系Sf21-veroACE2，最后利用表达Spike蛋白的重组杆状病毒与Sf21-veroACE2细胞进行了病毒感染的初步研究。　　 第1章：文献综述。简要介绍了SARS冠状病毒的基本特征和SARS病毒的受体研究进展叙述了本文的研究目的和意义。　　 第2章：使用一步RT-PCR的方法从Vero E6细胞中扩增得到2418 bp的ACE2全长编码基因。将得到的ACE2基因序列克隆到pGEM-T Easy载体上，用PCR及酶切鉴定后测序。测定结果表明，所克隆的片段序列与GenBank序列中人ACE2基因的核苷酸同源性为94％，氨基酸的同源性为96％，鉴定为非洲绿猴肾细胞来源的血管紧张素转换酶2，命名为veroACE2，该序列已录入GenBank，登录号为AY996037。对veroACE2序列进行了生物信息学分析，比较了已经报道的人、鼠、果子狸、猫、雪貂的ACE2的氨基酸序列，并对veroACE2蛋白的基本特性进行了预测和分析。　　 第3章：为了制备ACE2的抗体，本文将Vero E6细胞来源的veroACE2和果子狸来源的pcACE2的全长基因分别克隆到表达载体pProEXHTb和pGEX-KG上，并在大肠杆菌E.coli中进行了原核表达，通过SDS-PAGE对目的蛋白进行了纯化回收。将纯化后的蛋白多次免疫兔子，得到多克隆血清抗体Anti-veroACE2和Anti-pcACE2。通过Western-Blot对两种抗血清进行了鉴定检测。两种抗血清分别特异性的识别表达veroACE2和pcACE2蛋白的样品。这为今后深入研究ACE2的组织分布、细胞内定位及与Spike蛋白质之间相互作用的生物学意义提供了一个有用的实验工具。　　 第4章：构建含veroACE2的重组表达质粒pIZ-veroACE2，用脂质体包裹纯化的pIZ-veroACE2，体外转染草地贪夜蛾细胞系Sf21，通过Zeocin抗性筛选获得抗性的稳定表达细胞系。利用RT-PCR筛选出有veroACE2转录的克隆细胞株，用PCR和Western blot进一步分析，鉴定出稳定表达veroACE2的克隆细胞株。　　 第5章：利用AcMNPV的Bac-to-Bac系统，构建了重组杆状病毒AcBac-Spike-eGFP和AcBac-eGFP。Western blot分析发现Spike蛋白被包装到AcBac-Spike-eGFP的BV中。利用荧光显微镜观测和流式细胞仪分析比较了两种重组杆状病毒在Sf21-veroACE2细胞及Sf21细胞中的感染效率，结果表明在病毒感染量低时(M.O.I=0.1)，带Spike蛋白的AcBac-Spike-eGFP病毒进入Sf21-veroACE2细胞的效率要明显高于其它对照组。