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背景和目的: 近年来,不少研究揭示除了经典途径免疫细胞(包括B淋巴细胞和浆细胞)能产生免疫球蛋白G(IgG)外,肿瘤细胞、睾丸的生精细胞和胎盘滋养层细胞等也能够自身产生IgG。这些由其它非经典免疫细胞产生的IgG(特别是非对称IgG)已经被早期多个科研团队证实可能与肿瘤细胞的免疫逃逸机制及胎儿免受母体异体排斥有关。本课题组前期研究已经证实,正常人的精子细胞能够产生并分泌出IgG。而正常人精子细胞所产生IgG的功能,目前并不清楚。 本研究(1)通过从正常人精子中提取细胞总蛋白,过重组蛋白 G层析柱,分离并提纯得到人精子细胞的IgG;(2)通过间接 ELISA法,证明正常人精子所产生的IgG中含有非对称性IgG,并计算出其在精子总IgG中所占比例为22.71%;(3)应用免疫蛋白印迹法,揭示正常人精子IgG能够与不同组织来源(如胎盘,肿瘤,正常人血浆)的对称性和非对称性IgG相互作用;(4)通过免疫组织化学或者免疫细胞化学法,显示正常人精子IgG能够与人外周血中提取的中性粒细胞相互作用。 材料与方法: 1研究对象标本来源于汕头大学医学院临床医学系的在读的健康的男性大学生、研究生和汕头大学医学院附属第一医院生殖中心精子标本检测正常的男性患者。标本量305例,平均年龄35岁。(采样获汕大医学院医学伦理委员会批准) 2细胞或组织里面IgG的提取按重组蛋白G Agarose试剂盒的操作步骤将胎盘组织细胞,肿瘤组织细胞,和精子细胞中所含的IgG进行提取。 3对称性IgG和非对称性IgG的分离按Con A Sepharose?4B试剂盒的操作步骤,将胎盘组织细胞,肿瘤组织细胞中提取的免疫球蛋白G分为对称性的IgG和非对称性的IgG。 4生物素微量蛋白标记按AnaTag? Biotin微量蛋白标记盒的操作步骤将已分离好的精子总IgG、胎盘细胞或肿瘤细胞来源的对称性或非对称性IgG标记上生物素,以用作免疫蛋白印迹或者免疫组化中的一抗。 5酶联免疫法(ELISA)检测精子IgG浓度按检测人IgG的免疫过氧化物酶法试剂盒步骤,测出精子总IgG的浓度,用一定量的精子总蛋白过Con A4 B层析柱,再测出分离收集到的对称性IgG的浓度,从而可间接算出精子非对称IgG在总IgG中所占的比例。 6银染法(Sliver staining)检测从组织和精子中提取出的IgG纯度。 7免疫印迹法(Western blot, WB)探究与精子所产生的IgG相互作用的蛋白质类型。 8免疫组织化学法(Immunohistochemistry,IHC)探研精子所产生的IgG是否与某些组织产生IgG的细胞相互作用。 9免疫细胞化学(Immunocytochemistry,ICC)探究精子IgG能否与机体外周血白细胞相互作用。 结论: 正常人的精子能够自身产生对称性和非对称性IgG;精子IgG能够与不同来源的IgG及外周血的中性粒细胞相互作用。