仙草作为一种食用植物资源,可制成具有保健作用的功能性食品和具有特殊活性的药用价值。仙草黄酮是仙草中的主要成分,具有诸多的生物活性。本研究以福建龙岩仙草为原料,采用响应面法对仙草中黄酮类化合物的提取条件进行优化,通过大孔树脂、葡聚糖凝胶柱层析对提取物进行纯化分离,对主要组分进行结构鉴定,并对大孔树脂纯化产物的抗氧化活性及其作用机制进行探讨,进一步为仙草黄酮的研究提供理论参考。主要实验结果如下:利用乙醇提取法提取仙草黄酮,考察了乙醇浓度、提取时间及液料比等因素对仙草黄酮得率的影响,采用响应面优化试验得到浸提黄酮的最佳条件:乙醇浓度45%,提取时间2 h,液料比15:1,此条件下测得黄酮最大得率为13.41%。采用大孔树脂及葡聚糖凝胶柱层析法,对仙草黄酮粗提物进行分离纯化。选择大孔树脂HPD-100纯化的最佳工艺条件为:上样浓度30 mg/m L,上样量3 BV,上样流速3 BV/h,洗脱剂乙醇浓度60%,洗脱流速6 BV/h。将大孔树脂纯化后的仙草黄酮（CMBF）用Sephadex LH-20层析柱进行进一步的分离,分离条件为:上样浓度为10 mg/m L,上样量为2 mL,洗脱速率为0.5 m L/min,用30%、50%、70%、90%甲醇各100 m L进行梯度洗脱,分离得到两种单一的组分MBF1、MBF2。MBF1经HPLC、¹H-NMR、¹³C-NMR分析鉴定可推测为迷迭香酸,MBF2可推测为5,7,4’-三羟基-黄酮-3-O-β-D-葡萄糖苷。仙草黄酮具有明显的体外抗氧化活性。CMBF体外清除DPPH自由基、羟自由基和超氧阴离子自由基的IC₅₀值分别为14.63μg/mL,0.28 mg/mL和1 mg/m L。在细胞水平上,仙草黄酮CMBF在5μg/mL-250μg/mL浓度范围内,对LO₂细胞的H₂O₂氧化损伤具有保护作用。与模型组相比,CMBF（5μg/mL）能明显减弱H₂O₂诱导LO₂细胞活力下降（P<0.01）,同时,上清液中LDH活力及细胞MDA水平分别降低了1.1倍、1.3倍（P<0.01）,并呈一定浓度依赖性;CAT活力较模型组升高了56.5%（P<0.01）。CMBF浓度为250μg/m L时,GSH-Px活力较模型组提高了64.3%（P<0.01）,与Vc对照组水平相近,而CMBF浓度为5μg/m L时,SOD活力有显著性的升高（P<0.05）。在基因水平上,利用RT-PCR法测定抗氧化酶HO-1、Nrf2、GPx、SOD、CAT的基因表达量,初步探讨仙草黄酮抑制H₂O₂对LO₂细胞氧化损伤的抗氧化作用机制。结果表明:在H₂O₂作用下,细胞产生氧化应激反应,上调细胞中HO-1、Nrf2基因的表达,降低LO₂细胞中GPx、SOD、CAT的mRNA表达水平。与模型组相比,当CMBF浓度为50μg/m L、250μg/m L时,LO₂细胞中HO-1和Nrf2基因的表达量均表现极显著性增加（P<0.01）;CMBF浓度为250μg/mL时,细胞中GPx、CAT基因表达量较模型组分别极显著地升高1.31倍、1.89倍（P<0.01）;CMBF浓度为5μg/mL时,SOD的基因表达显著升高（P<0.01）。研究表明,仙草黄酮对LO₂细胞中抗氧化蛋白HO-1、Nrf2等有较强的诱导作用,并通过改善抗氧化酶GPx、CAT、SOD的活性发挥氧化损伤保护作用。