目的 构建人疱疹病毒8型(HHV8)小衣壳蛋白(ORF65)的原核高效表达克隆,制备用于HHV8感染血清学诊断的基因工程抗原。 方法 应用BCBL-1细胞(HHV8阳性而EBV阴性)制备粗提细胞抗原,并用Sephadex G-75层析柱初步纯化,获得HHV8细胞工程抗原。应用PCR技术扩增HHV8 ORF65编码区,PCR产物与原核表达载体pThioHisA分别双酶切后连接,转化宿主菌E.coli BL21,IPTG诱导融合蛋白表达,经带有6个组氨酸标签的亲和层析柱纯化获得基因工程抗原,Western blot检测其抗原性和特异性。选择最适抗原浓度包被96孔ELISA反应板,对相关病人进行检测,并与Biotrin公司生产的HHV8 IgM和HHV8 IgG抗体IFA检测试剂盒和Qiagen公司ELISA检测试剂盒进行比较。 结果 HHV8 ORF65小衣壳蛋白可在E.coli BL21中高效表达,Western blot检测结果表明该融合蛋白可与5份HHV8特异性IgM阳性血清的4份(80%)和所有10份(100%)HHV8特异性IgG阳性血清发生反应,而10份阴性血清均不与之发生反应。基因工程抗原的各项技术指标与Biotrin公司和Qiagen公司检测试剂盒有较好的符合率。 结论 HHV8 ORF65重组蛋白具有良好的抗原性和特异性,进一步完善后可用于HHV8感染的临床检测,为进一步研制开发新型HHV8诊断试剂提供了有价值的理论和实验依据。