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目的探讨福州地区急性呼吸道感染患儿中新型人类冠状病毒NL63(Human Coronavirus NL63,HCoV-NL63)、人类冠状病毒229E(Human Coronavirus 229E,HCoV-229E )、人类博卡病毒(Human Bocavirus,HBoV)的感染情况,并探讨其临床意义。方法收集2006年11月～2007年5月冬春季福建省立医院门诊和住院急性呼吸道感染患儿鼻咽分泌物标本223例。年龄15天～13岁。其中上呼吸道感染134例;下呼吸道感染89例。建立单一逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)检测HCoV-NL63 1b、1a基因及HBoV NP1基因;巢式RT-PCR(nested RT-PCR,nRT-PCR)检测HCoV-229E M基因。建立多重RT-PCR(multiplex RT-PCR,mRT-PCR)同时检测HCoV-NL63 1b基因、HBoV NP1基因及HCoV-229E M基因。对阳性产物进行核苷酸序列测定,并将HCoV-NL63、HBoV、HCoV-229E所测序列进一步进行同源性分析以及系统进化树分析。结果1、223例标本中,共检出HCoV- NL63阳性3例((1.3%),HCoV-229E阳性2例(0.9%),HBoV阳性9例(4.0%)。2、3例HCoV-NL631b阳性扩增产物进行序列测定,序列证实为HCoV-NL63部分1b基因。对1b基因检测阳性的标本再用1a基因的引物进行PCR扩增,扩增产物进行核苷酸序列测定,结果分析显示核苷酸序列完全一致;与GenBank中HCoV- NL63部分代表株序列一致性达97%～100%,氨基酸一致性达100%。系统进化树分析显示HCoV-NL63与荷兰的一株原型株(NC-005831)、加拿大代表株(AY675541)的亲缘性最近。3、2例HCoV-229E阳性扩增产物进行序列测定,结果分析显示核苷酸序列完全一致,HCoV-229E阳性扩增产物核苷酸序列与GenBank中部分HCoV-229E代表株序列一致性达98%-99%,氨基酸同源性达100%。4、随机选取3例HBoV阳性扩增产物进行序列测定,结果分析显示核苷酸序列完全一致,与GenBank中HBoV代表株序列一致性达到99%～100%,氨基酸同源性达100%;系统进化树分析显示与瑞典一原型株Stockholm 2(st2,DQ000496)及北京的代表株BJ3064、BJ3124 (DQ988934,DQ353697)的亲缘关系最近。5、9例HBoV阳性标本中,患儿的年龄均为5岁以下,急性下呼吸道感染组阳性率为7.9%(7/89),显著高于急性上呼吸道感染组的1.5%(2/134)(x2=5.27,P<0.05)。1例HBoV阳性患者合并呼吸道合胞病毒(Respiratory Syncytial Virus ,RSV)感染。6、3例HCoV-NL63和2例HCoV-229E阳性标本均为急性下呼吸道感染的患儿。7、运用mRT-PCR对223份临床标本的检测结果与用单一RT-PCR检测HCoV-NL63、HBoV和用巢式RT-PCR检测HCoV-229E结果完全一致。结论1、HCoV- NL63、HCoV- 229E和HBoV是福州地区2006～2007年冬春季急性呼吸道感染患儿的重要病毒病原。2、HCoV-NL63病毒感染对低龄患儿可能引起严重并发症,值得注意。3、HBoV主要引起急性下呼吸道感染,且以5岁以下婴幼儿易感;HBoV阳性患者可以合并RSV感染。4、mRT-PCR可代替单一RT-PCR用于临床呼吸道标本HCoV-NL63、HBoV及HCoV-229E的快速检测。