【摘 要】
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目的: 检测异位荷瘤鼠体内脏器NRP-1的蛋白表达水平及基因表达水平;通过磁共振成像技术检测靶标NRP-1的新型分子探针USPIO-PEG-tLyP-1与脑胶质瘤组织的特异性结合能力;检测US
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目的: 检测异位荷瘤鼠体内脏器NRP-1的蛋白表达水平及基因表达水平;通过磁共振成像技术检测靶标NRP-1的新型分子探针USPIO-PEG-tLyP-1与脑胶质瘤组织的特异性结合能力;检测USPIO-PEG-tLyP-1对荷瘤鼠的生物毒性。 方法: 1.液氮中取出U87胶质瘤细胞,待细胞复苏传代至对数生长期。向Balb/c-Nu裸鼠左侧腋背侧注入对数生长期的胶质瘤细胞。4周后处死裸鼠,得到新鲜的胶质瘤组织切至大小约为2-3mm3,用特制的组织接种器,分别接种于剩余裸鼠左侧腋背侧。 2.在无菌环境中饲养荷瘤鼠,10天后随机抽取6只荷瘤鼠,处死荷瘤鼠取肿瘤组织行病理染色,取肿瘤、脑、肝、肾组织,通过Western-blot,PCR等方法分别从蛋白及基因层面检测NRP-1的表达水平。 3.通过碳二亚胺法制备以NRP-1为靶点,以tLyP-1为配体,以USPIO为核心的新型磁共振分子探针USPIO-PEG-tLyP-1, 通过动态光散射法检测USPIO-PEG-tLyP-1及USPIO-PEG的水合粒径。 4.将18只无菌条件生长状态良好、精神状态可、质量为20±3g荷瘤裸鼠随机分为A组、B组、C组,每组6只。经尾静脉给予A组荷瘤鼠20μl生理盐水、B组荷瘤鼠20μl磁共振对比剂USPIO-PEG,C组荷瘤鼠20μl磁共振分子探针USPIO-PEG-tLyP-1。利用磁共振成像T2WI、T2mapping序列检测三组荷瘤鼠肿瘤组织0h、6h、12h、24h的t2弛豫时间,绘制感兴趣区并记录。 5.处死荷瘤鼠,取A、B、C三组肿瘤组织行普鲁士蓝染色,检测新型分子探针USPIO-PEG-tLyP-1与胶质瘤组织特异性结合能力。 6.通过HE染色检测新型分子探针对肝肾的损伤程度,查看血清中肝功能、肾功能等指标含量变化以检测新型分子探针USPIO-PEG-tLyP-1及磁共振对比剂USPIO-PEG对荷瘤鼠的生物毒性。 结果: 1.无菌条件下饲养裸鼠,胶质瘤组织移植法制备异位胶质瘤模型成瘤率为100﹪。 2.异位脑胶质瘤模型中,NRP-1在胶质瘤组织在蛋白及基因层面均比脑组织、肝组织、肾组织高表达(P<0.01) 3.新型分子探针物理性质稳定,Fe含量为4.2mg/ml。水合粒径大小分别为34.28nm和42.98nm。 4.小动物7.0T核磁共振显示,A组荷瘤鼠t2值未见明显改变,B组荷瘤鼠注射分子探针组24h后t2值变化较6h、12h时更明显(P﹤0.05);C组t2值在6h较0h明显(P<0.01), 24h变化更明显(P<0.01)。 5.处死荷瘤鼠,取肿瘤组织行普鲁士蓝染色,结果显示C组蓝染颗粒明显B组多(P<0.01),A组未发现蓝染颗粒。 6.对肝、肾组织行HE染色,结果显示,各组小鼠肝组织、肾组织未见明显组织坏死,各组织形态无明显变化。摘眼球收集血液,血清学检测显示肝功能、肾功能各指标无明显异常。 结论: 在荷瘤鼠体内,胶质瘤组织中NRP-1明显比肝、肾、脑组织高表达(P<0.05);磁共振结果显示USPIO-PEG-tLyP-1可以与胶质瘤组织特异性结合。USPIO-PEG-tLyP-1无明显的生物毒性。为胶质瘤的临床诊断提供一定的理论依据。
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