【摘 要】
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目的:通过体外开放和拮抗大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)细胞膜大电导钙激活钾通道(BKca),观察干预离子通道对BMSCs增殖的影响并探讨其机制。方法:该研究分离培养原代大鼠BMSCs,稳定
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目的:通过体外开放和拮抗大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)细胞膜大电导钙激活钾通道(BKca),观察干预离子通道对BMSCs增殖的影响并探讨其机制。方法:该研究分离培养原代大鼠BMSCs,稳定传至3代。采用BKca通道特异性开放剂(NS1619)和拮抗剂(IBTX)对BMSCsS进行体外干预,根据干预条件不同,细胞分为4组:Control组、DMSO组(溶剂对照组)、NS1619组、IBTX组。平板克隆、MTT检测细胞克隆形成能力以及细胞增殖活力;流式细胞术分析细胞周期分布及细胞凋亡率;Western blot、定量PCR比较周期蛋白cyclin D1在基因和蛋白表达水平上的差异;整细胞膜片钳技术分析BMSCs细胞膜电生理特性。结果:(1)成功分离培养原代大鼠BMSCs,并稳定传至第3代。(2)NS1619组细胞膜K+外向电流较Control组振幅增大(P<0.01);(3)NS1619组细胞增殖能力和克隆形成能力较Control组增强(P<0.05),凋亡较Control组减少(P<0.05);(4)此外NS1619组G1期细胞数明显小于Control组(P<0.01),G2期细胞数明显大于Control组(P<0.05),激活BKca通道明显促进BMSCs从G1期向S期过渡;(5)Western blot、定量PCR都显示激活BKca通道导致BMSCs细胞周期蛋白及mRNA表达上调。(6)而拮抗BKca通道则相反,IBTX组检测的各组值均与NS1619组相反。DMSO组各检测值与Control组无明显差异(P>0.05),溶剂对本实验不造成干扰。结论:根据实验结果推测:(1)开放BKca通道可以通过影响BMSCs周期进程最终调节细胞增殖。(2)该作用可能与BKca具有调节细胞膜K+电流外流的电生理特性有关。
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