冠状病毒（CoVs）是一种含有最大基因组的单股正链RNA病毒,可导致人和动物的轻度或致死性呼吸道和胃肠道疾病。冠状病毒基因组N端包含两个大的开放阅读框（Openreading frame,ORF）,ORF1a和ORF1b;C端主要包含编码结构蛋白的基因,编码S蛋白（纤突糖蛋白）、M蛋白（膜蛋白）、E蛋白（包膜蛋白）和N蛋白（核蛋白）四种结构蛋白。冠状病毒S蛋白是一种同源三聚体Ⅰ类融合蛋白,包括三个S1头和三个S2茎,其主要功能是首先通过S1亚基与宿主细胞表面受体结合,激发构象变化,再通过S2亚基促进病毒和宿主的膜融合,从而将病毒基因组释放到细胞质中,介导病毒进入宿主细胞。冠状病毒S蛋白既是宿主细胞向性的主要决定因素,又是病毒进入宿主细胞的媒介。已有研究报道SARS-CoV、MERS-CoV与抗体复合物的冷冻电镜结构,病毒-抗体免疫复合物的结构研究可以帮助更好地理解抗体介导中和的分子机制,也为基于结构的疫苗设计提供有价值的信息。本研究首先以PEDV S蛋白三聚体的表达纯化及与单克隆抗体结合试验为例,依次表达纯化SeACoV、SARS-CoV-2的S蛋白三聚体,为后续蛋白-抗体复合物冷冻电镜结构解析奠定基础。具体研究如下:1.对冠状病毒S基因序列进行改造和优化,构建重组质粒,利用杆状病毒表达系统,在昆虫细胞中表达了PEDVS蛋白三聚体,利用亲和层析法和凝胶过滤色谱法纯化蛋白,收集纯化后的S蛋白,交联和密度梯度离心法优化蛋白品质并负染观察。2.通过Western Blot和ELISA等试验,利用PEDV S蛋白三聚体鉴定实验室现存的2C2G11、2G4C5、3B10G8和7D7G1四株PEDV S单体蛋白的单克隆抗体。3.用与PEDV S蛋白三聚体相同的表达条件,表达纯化SeACoV、SARS-CoV-2的S蛋白三聚体并检测。