肝脏再生增强因子(augmenter of liver regeneration,ALR)是肝脏再生过程中的一个重要调控因子。人ALR(hALR)是分子量为15 Ku的蛋白质分子,由125个氨基酸残基组成,在非变性条件下以同源二聚体的方式存在,具有较强的耐热性,70℃、30min不变性、不失活。肝再生研究发现ALR能增强肝细胞扩增,阻止粗面内质网、线粒体和其它细胞器的损坏,抑制淋巴细胞扩增,对肝脏再生及肝脏功能的修复有着重要作用。动物实验表明ALR对急性肝功能损伤有明显疗效。然而ALR的作用机理尚未完全明确,寻找与ALR相互作用的蛋白质将有助于进一步阐明其作用机制。 本课题以hALR的编码序列为诱饵,采用细菌双杂交系统对人肝cDNA文库中可能与ALR相互作用的蛋白质进行了筛选,结果共得到32个阳性克隆,经过序列测定证明分别为编码人氨基乙酸-N-乙酰转移酶、集落刺激因子、凝血素(hemopexin)、补体C3、α-酸性糖蛋白2、纤维蛋白溶酶原、色素上皮细胞来源因子SERPIN F1、白蛋白、线粒体QD8159、线粒体单倍体As8D、染色体11qCMB9-78H16克隆、cDNA克隆IMAGE:3535684等的基因。经过文献调研和归类分析,选取可能与hALR功能最相关的氨基乙酸-N-乙酰转移酶(glycine-N-acyltransferase,GAT)进行了进一步的克隆、表达和相互作用研究。 GAT是成年动物肝细胞核基因编码的一种线粒体蛋白,为单体分子,有两种不同的亚型。其中a亚型由296个氨基酸残基组成,为线性分子,分子量约为30Ku,pI为6.8:b亚型由163个氨基酸残基组成,是分子量约18.5Ku的线性分子。b亚型的3’编码区以及3’UTR区与a亚型有所区别,因此b亚型的转录本较小,其C-端的氨基酸序列与a亚型不一样。稳定性研究显示,GAT在100mmol/LNaCl、KCl和K3PO4溶液条件下,其酶活性分别为47%、21%和32%。GAT在4℃ 72h、25℃ 4h以及37℃ 1h其酶活性均无改变。GAT具有多种脂酰辅酶A的活性,在线粒体中催化氨基乙酸与乙酰辅酶A底物发生反应,在内