ES细胞中的核心转录因子在维持细胞干性中起着至关重要的作用,过表达核心转录因子使得体细胞重编程成为可能。肿瘤干细胞(CSC)是肿瘤耐药性、持久潜伏和转移的重要原因之一。在肿瘤干细胞中,核心转录因子的表达情况能影响细胞的分化,从而影响肿瘤的发生。小分子化合物作为一种非肽类的有机化合物,能够识别高级蛋白质结构。其在胚胎干细胞的多能性调控,以及肿瘤的靶向治疗中都有着广泛的应用。目前已经有一些小分子化合物应用于体细胞重编程或者干细胞定向分化等方面。核心转录因子蛋白表达程度的高低是细胞多能性改变的重要指标之一。本研究建立了一种简单易行的、可靠的高通量筛选影响核心转录因子蛋白水平的小分子化合物的系统,并且以其中一个重要的核心转录因子一Nanog为例,进行了应用。本研究通过慢病毒包装技术,构建稳定表达Luciferase-Ub(k0)-Nanoluc-Nanog融合蛋白的Hela细胞系,可以实现对Nanog的稳定性变化的检测,从而达到高通量化筛选的目的。Nanoluc具有蛋白量小、信号强、灵敏、线性化好、稳定、灵敏等优点。将Nanoluc与目的蛋白融合能在一定程度上反映蛋白稳定性的变化,而Luciferase可以起到标定内参的作用。双荧光报告系统的结合可以在筛选的过程中减少假阳性的产生。本研究利用该稳定细胞系,对国家化合物样品库一万四千种化合物进行了筛选,筛选得到了一些明显改变Nanog蛋白表达量的化合物。本研究为进一步阐明Nanog的生物生理学功能、干细胞研究,以及肿瘤相关疾病的治疗奠定了基础。