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赤点石斑鱼(Epinephelus akaara)是名贵海水经济鱼类，雌雄同体，雌性先熟，存在天然性逆转现象。雌鱼一般在6龄性逆转为雄鱼，因而雌雄亲鱼性成熟不同步，导致受精率较低，制约着石斑鱼的人工大规模养殖。目前主要是用雄性激素来培育雄亲鱼，但激素的过多应用有很多弊端，要想彻底摆脱激素诱导性转，只有阐明其性别逆转的分子机制，才能进行人工改良以达到性别控制。 用甲睾酮片饲喂2～4龄赤点石斑鱼，6周后90％以上的雌鱼性逆转为功能性雄鱼。应用SMART技术构建了石斑鱼性反转前、后性腺组织的SMART cDNA文库。用抑制性差减杂交(SSH)技术构建了性反转雄鱼性腺差异表达基因的差减cDNA文库(正向差减文库)和正常雌鱼性腺差异表达基因的差减cDNA文库(反向差减文库)。从差减cDNA库中随机挑取1200个克隆进行了PCR筛选和斑点杂交筛选，得到120个差异表达cDNA片段。挑选71个cDNA克隆测序，将所测序列经GenBank检索，发现有51个cDNA片段序列无明显的同源性，20个片段与报道的基因有较高同源性。在这20个具同源性的片段中，核糖体蛋白出现的频率最高，还有一些是与代谢活动有关的蛋白质，其中有3个片段可能是与性别分化密切相关的重要功能基因，它们分别是鱼钙调蛋白基因(GenBank accession：AY281363)、鱼活性蛋白激酶C受体基因(GenBank accession: AY281364)和鱼一氧化氮合酶蛋白抑制剂基因(GenBank accession: AY281365)。 运用抑制性差减杂交技术(suppression subtractive hybridization，SSH)，结合SMART cDNA合成和RACE-PCR方法，从性反转雄鱼性腺的差减cDNA文库中克隆到了石斑鱼一氧化氮合酶蛋白抑制剂基因(EPIN)。该基因cDNA全长为四川大学博士学位论文499bP，开放阅读框长270饰，编码的蛋白质由89个氨基酸组成，5‘端非编码区74 bp，3’端非编码区1 55bP，具有脊椎动物典型的ACCATG起始序列.虚拟Northem杂交表明，万尸脚在性反转雄鱼性腺中大量表达，而在正常雌鱼性腺中表达甚微.性反转不同时期性腺RT一PCR和认触stem印迹分析表明，在雌鱼转变为雄鱼的过程中性腺里百尸石V的转录水平逐渐增加。各种组织的RT.PCR显示，五尸石V在脑中各组织和心、肝、脾、肾有转录，而在肌肉中未见扩增带。免疫组化结果显示EP创在性反转雄鱼性腺的各级精细胞和间质细胞的胞质中大量表达。这些结果提示五尸石V基因可能是促使赤点石斑鱼由雌向雄转变的重要功能基因之一。 在筛选性反转雄鱼性腺差减cDNA库时检出了石斑鱼钙调蛋白基因(ECa娜，用RACE一PCR方法获得了该基因的全长cDNA片段。该基因cDNA全长为582bP，开放阅读框长450bP，编码的蛋白质由149个氨基酸组成，5，端非编码区74 bp，3’端非编码区58 bp。虚拟Northem杂交表明，EC劝M在性反转雄鱼性腺中表达，而在正常雌鱼性腺中表达微弱。运用半定量RT.PCR技术考察了其在石斑鱼不同组织中的mRNA的转录水平，结果显示ECaM在脑、心、肝、脾、肾都有转录，在精巢和下丘脑中转录水平较高，而在肌肉中转录甚弱。性反转不同时期性腺的半定量RT一PCR及W七stem杂交表明，性逆转过程中性腺里ECdM的表达量上调。本研究结果提示钙调蛋白可能在赤点石斑鱼性逆转过程中发挥着作用，ECaM可能是促使石斑鱼由雌向雄转变的重要功能基因之一。 用PCR方法从赤点石斑鱼下丘脑中克隆到肋戈夕基因的完全编码区，并研究其时空表达模式。肋工夕cDNA开放阅读框长1.44 kb，编码479个氨基酸，其中104一169间的氨基酸为HMG盒。RT一PCR分析显示在心脏等4种组织中检测不到转录本，而在4种脑组织中可检测到不同强弱的转录本，呈现出很强的中枢神经系统特异性;在正常雌鱼性腺和性反转雄鱼性腺中均能检测到转录本的存在，表现出性腺特异性。这些结果提示Sd尤夕基因可能在石斑鱼的中枢神经系统发育和性腺分化过程中起重要作用。关键词:石斑鱼性逆转抑制性差减杂交五烈N占政，