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目的:1掌握保定市铜绿假单胞菌耐药情况及特点,指导临床医师合理使用抗生素,延缓细菌耐药产生、有效预防及控制院内感染。2选取耐亚胺培南铜绿假单胞菌,检测β-内酰胺酶编码基因种类和外膜蛋白Opr D2基因缺失状况,探讨铜绿假单胞菌对亚胺培南药物的耐药机制。方法:1标本来源收集保定市第一中心医院住院患者2016年7月-2017年1月送检标本分离的铜绿假单胞菌,根据《全国临床检验操作规程》第3版的要求,用羊血培养基对送检标本进行细菌分离和培养,鉴定菌株采用法国梅里埃公司VITEK-2全自动微生物鉴定仪。2药敏实验将铜绿假单胞菌纯化后进行耐药性检测,采用VITEK-2全自动微生物鉴定仪和K-B法测定其对氨苄西林、亚胺培南等23种常用抗菌药物的敏感性,挑选出耐亚胺培南的铜绿假单胞菌株。3耐药基因检测使用Maxwell?16 Cell LEV DNA Purification Kit试剂盒提取DNA,用聚合酶链反应(PCR)法扩增耐亚胺培南菌株β-内酰胺酶基因和外膜孔道蛋白D2基因。产物经2.0%琼脂糖凝胶电泳,凝胶成像仪观察电泳结果,与标准量DNAMarker相比较,对PCR产物的电泳结果进行分析和摄像,出现与目的基因片段分子相当的条带判为阳性,照相保存影像。结果:1铜绿假单胞菌对常用抗菌药物的耐药情况测定了2016年7月到2017年1月临床分离的122株铜绿假单胞菌对23种抗生素的耐药性,耐药率结果为:氨苄西林98.36%、阿米卡星10.66%、环丙沙星25.41%、庆大霉素16.39%、妥布霉素15.57%、复方新诺明96.72%、氨苄西林/舒巴坦96.72%、头孢他啶17.21%、亚胺培南40.98%、哌拉西林18.03%、头孢唑林97.54%、头孢吡肟20.49%、左氧氟沙星22.95%、美罗培南23.77%、头孢替坦95.9%、哌拉西林+他唑巴坦(常规用量)13.11%、头孢曲松98.36%、头孢哌酮36.07%、头孢哌酮/舒巴坦15.57%、头孢呋辛酯95.9%、头孢呋辛钠95.9%、比阿培南23.77%,呋喃妥因只用于尿液标本的药敏试验,耐药率100%。2β-内酰胺酶编码基因检出情况从50株耐亚胺培南的铜绿假单胞菌检出β-内酰胺酶编码基因TEM(3株)、PER(3株)、VEB(1株)、GES(2株)、OXA-2(2株)、OXA-10(3株)、CTX-M-1(3株)。3金属β-内酰胺酶基因检出情况从50株耐亚胺培南的铜绿假单胞菌检出金属β-内酰胺酶基因VIM(9株)、IMP(11株)、SIM(0株)、SPM(5株)、GIM(0株)。4膜孔蛋白Opr D2基因的缺失情况从50株耐亚胺培南的铜绿假单胞菌检测出孔蛋白Opr D2基因缺失31株,缺失率为62%。结论:1保定市铜绿假单胞菌对头孢呋辛酯、头孢呋辛钠、头孢替坦、头孢曲松、氨苄西林、复方新诺明等抗生素有很高的耐药率。2铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药率40.98%。3 50株耐亚胺培南的铜绿假单胞菌β-内酰胺酶编码基因检出率为58%(29株),其中有10株同时含有两种或两种以上基因;Opr D2基因缺失率高(62%)。提示铜绿假单胞菌对β-内酰胺类抗生素的耐药是由多种耐药基因共同控制的,该菌具有复杂的耐药机制。4应加强铜绿假单胞菌耐药性的监测及耐药基因的分子流行病学研究,防止耐药菌株播散,提高临床治愈率。