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雪松是松科Pianaceae植物雪松属Cedrus Trew树种的泛称,其针叶为13个可供药用的松针之一[1],雪松松针主要化学成分有木脂素类、黄酮类、有机酸类、多糖类及针叶胶等,具有抗肿瘤、抗氧化、抗病毒及蚊虫毒杀等多种功效。为了开发利用雪松松针,本论文针对雪松松针总木脂素的提取纯化工艺和体外抗肿瘤作用进行了系统的研究。1.雪松松针总木脂素的含量测定及提取工艺研究:采用磷钼酸显色分光光度法,以厚朴酚为对照品,在最大吸收波长740nm处测定雪松松针总木脂素含量,在单因素试验基础上,以乙醇浓度、料液比、提取时间为响应因子,雪松松针总木脂素含量为响应值,根据Box-Behnken中心组合设计进行了三因素三水平的试验及响应面分析。优化得到的雪松松针总木脂素的提取工艺为:乙醇浓度为77.96%、液料比为25:1,提取时间为1.78h,在最佳工艺条件,雪松松针总木脂素含量达到99.2mg/g,与理论预测值100.49 mg/g相近。2.大孔吸附树脂纯化雪松松针总木脂素的工艺研究:以雪松松针总木脂素的吸附率与解吸附率为指标,通过对S-8、D101、AB-8、X-5、NKA-9及HPD-100树脂的吸附-解吸附能力考察,从中筛选出了适合纯化雪松松针总木脂素的大孔树脂,并确定纯化工艺参数。结果表明,AB-8树脂为纯化雪松松针总木脂素的优良材料;最佳纯化工艺为:上样量为6 BV,浓度为2.18 mg/m L,以1.5 mL/min的流速进行动态吸附;吸附饱和后,用蒸馏水以1.5 m L/min冲洗5 BV除去水溶性杂质及未吸附于柱上的残液;最后用4 BV的80%乙醇以1 m L/min的流速进行解吸,收集解析液经浓缩、干燥得到平均含量为57.77%的雪松松针总木脂素提取物。3.雪松松针总木脂素及蛇床子素的抗肿瘤活性评价:选用人宫颈癌HeLa细胞株、人胃癌细胞株MKN45、人肺癌细胞株A549、人肝癌细胞株HepG2及人结肠癌细胞HT-29,采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法进行体外细胞增殖抑制试验,筛选雪松松针总木脂素及其从中分离得到的木脂素单体蛇床子素的敏感瘤株。结果表明,雪松松针总木脂素和蛇床子素对5种肿瘤细胞的增殖均有较强的抑制作用,雪松松针总木脂素的抑制作用从强到弱依次为A549>He La>Hep G2>HT-29>MKN45;蛇床子素的抑制作用从强到弱依次为A549>HepG2>HT-29>MKN45>HeLa,其中雪松松针总木脂素和蛇床子素对人肺癌细胞株A549作用最强,IC50分别为39.82μg/m L和35.68μg/m L;采用流式细胞仪开展细胞周期及凋亡研究,探讨雪松松针总木脂素和蛇床子素的体外抗肿瘤作用机制,结果表明,雪松松针总木脂素能够诱导人肺癌A549细胞凋亡,细胞被阻滞于G2/M期,蛇床子素作用于肿瘤细胞A549也能够引起凋亡,并阻滞其停滞于G0/G1期。