【摘 要】
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目的 制备原核表达的hyrdC纯化蛋白及相应单克隆抗体,并以该抗体初步检测胃癌中hyrdC蛋白的表达。方法用RT-PCR方法获取人脾脏组织hyrdC基因序列,插入原核表达载体pET32a构建
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目的 制备原核表达的hyrdC纯化蛋白及相应单克隆抗体,并以该抗体初步检测胃癌中hyrdC蛋白的表达。方法用RT-PCR方法获取人脾脏组织hyrdC基因序列,插入原核表达载体pET32a构建重组质粒,纯化得到TRX-hyrdC融合蛋白,将其作为抗原免疫BALB/c小鼠,按常规方法制备抗hyrdC单克隆抗体,以ELISA、Western blot法筛选及鉴定;采用免疫组织化学法(SP法)比较胃癌组织及瘤旁正常组织中hyrdC抗体水平的差异。结果测序结果显示克隆到hyrdC ORF与GenBank中登录的序列一致。所获TRX-hyrdC融合蛋白分子量与理论计算值相符;成功制备了抗hyrdC单克隆抗体;Western blot法显示该抗体能特异性地结合人hyrdC蛋白;SP法测定显示,hyrdC蛋白在胃癌组织中表达明显高于正常胃组织(P<0.001)。结论 胃癌组织与瘤旁正常组织中hyrdC抗体水平有显著差异
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