论文部分内容阅读
目的探讨MLVA技术在云南大理地区结核分枝杆菌基因分型中的应用，初步研究大理地区结核分枝杆菌DNA多态性及基因型特征。方法收集大理地区肺结核患者的痰标本，分离培养和鉴定后利用MLVA基因分型技术，对其进行研究。本研究选取21个数目可变串联重复序列（VNTR）位点，采用聚合酶链反应（PCR）和琼脂糖凝胶电泳技术，建立检测大理地区结核分枝杆菌DNA指纹多态性方法，并应用Quantity one软件和BioNumerics（6.6）软件进行数字化和聚类分析。用SPSS（13.0）统计软件对120株结核分枝杆菌基因型成簇率、54株优势菌株结果进行统计分析，家族结果与数据库比对获得。结果1对120株结核分枝杆菌临床分离株和1株标准菌株H37Rv的21个位点进行检测，可分为6个基因型，呈现明显的多态性，21位点的HGI指数最高为0.838，最低为0.301，其中分辨力较高的是：MIRU26、Mtub21、Mtub30、Mtub39、Mtub4、MIRU31、MIRU16、Mtub29、MIRU10、MIRU40；中等分辨力的位点是：MIRU27、MIRU39、MIRU2、ETR-B、ETR-A、MIRU26、MIRU23、MIRU4、Mtub34；分辨力较低的位点是MIRU24、ETR-C。2采用UPGMA法对120株临床分离株和1株标准菌株H37Rv聚类分析，121株菌株可分为6个基因群（Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型、Ⅴ型、Ⅵ型）。Ⅰ型占50.4%（61/121）；Ⅱ型占30.6%（37/121）；Ⅲ型占6.6%（8/121）；Ⅳ型占5%（6/121）；Ⅴ型占4.1%（5/121）；Ⅵ型占3.3%（4/121）。Ⅰ型为主要流行基因型，标准菌株在Ⅱ型。3运用MST法对120株临床分离株和1株标准菌株H37Rv聚类分析，结果分为6个基因群，a群占86.7%，为主要流行基因型，标准菌株在a群。4将120株临床分离株和1株标准菌株与数据库比对，显示北京家族基因型占73%（88/121），非北京家族基因型占27%（33/121）。5120株分离株中是否感染优势菌株与年龄（χ2=0.181，P=0.671）、性别（χ2=0.312，P=0.577）之间差异均无统计学意义。6患者是否易感染双感菌株与年龄（χ2=2.788，P=0.095）、性别（χ2=2.094，P=0.148）之间均无统计学意义。结论1MIRU26、Mtub21、Mtub30、Mtub39、Mtub4、MIRU31、MIRU16、Mtub29、MIRU10、MIRU40位点是分析大理地区120例肺结核患者结核分枝杆菌基因分型的首选位点，该10个位点分辨力较高。2大理地区120例肺结核患者结核分枝杆菌有着较高的DNA基因多态性，MLVA基因分型至少分为六个基因群，主要流行菌型为Ⅰ型和a群。不同县市其主要基因型存在差异，大部分县市与总体的流行趋势相符。3大理地区120例肺结核患者感染成簇菌株基因型、优势菌株基因型、双感菌株基因型与患者性别、年龄均无关。4大理地区MLVA所选组合位点不同，分辨力不同，位点越多，HGI值越大，即分辨力越高。