麻痹性贝毒的分离检测及其对双壳贝类排泄的影响

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本论文主要研究麻痹性贝毒(PSP)的分离纯化及检测和对贝类排泄的影响。在PSP的分离纯化实验中,对用0.05mol/L醋酸从塔玛亚历山大藻中提取的PSP通过凝胶色谱柱Bio-Ge1 P2进行了初步纯化。称取80g Bio-Ge1 P2粉末填于2.6cmID×50cm层析柱中作为制备分离藻液的分离柱,流动相为0.05mol/L醋酸,收集得到的分液选用pH值检测和荧光点检验法检测。实验结果显示,PSP至29管即420min时,从凝胶色谱柱中洗脱出,至31管时完全洗脱出。实验表明通过凝胶色谱柱能够分离纯化得到一定纯度的PSP,同时实验中发现荧光点检验法检测法PSP作为一种简便易行的方法具有特定的检测现象,即含有PSP的溶液用2%碱性H2O2氧化时,表层会出现蓝色漂浮物,且当含有PSP的溶液加入2%碱性H2O2后如果未用0.05mol/L醋酸溶液停止反应,溶液表层会变花。因此本作者认为在PSP的常规检测中可使用荧光点检验法和小白鼠生物检测法相结合的方法进行,可为目前所面临的小白鼠福利问题提供建设性解决方案。 作者对小白鼠生物法(Mouse Bioassay,MBA)检测PSP的含量进行了补充修订,探讨了温度对小白鼠生物法测定麻痹性贝毒(Paralytic Shellfish Poisoning,PSP)含量的影响。在29℃~30℃和32℃~33℃下,用MBA测定从塔玛亚历山大藻(Alecandrium tamarense)中提取的PSP含量,用测得的PSP浓度(Y)和实际PSP浓度(X)表示温度对MBA测定PSP含量的关系。结果显示,温度为29℃~30℃时,y=0.507x+0.151(R2=0.9377,P<0.01);温度为32℃~33℃时,y=1.0469x+0.0545(R2=0.9807,P<0.01),温度变化与MBA测得的PSP含量呈正相关。温度为29℃~30℃和32℃~33℃时,用MBA测定PSP含量与实际PSP含量存在差别。本文亦对MBA法中萃取剂选择使用等问题进行了探讨,认为0.1 mol/L盐酸是最佳的萃取剂。 PSP对贝类排泄的影响方面,在水温20℃下,设置了0、100、500、1000、2000、4000 cell·ml-1六个藻类浓度组,以静水方法研究了塔玛亚历山大藻对青蛤和菲律宾蛤仔排泄的影响,具体指标包括排磷率,排氮率(氨氮、硝酸氮、亚硝酸氮)。亚硝态氮、硝酸氮、氨氮和活性磷的测定方法分别为磺胺-奈乙二胺法、锌镉还原法、Wattenberg比色法和抗坏血酸还原法。结果显示,塔玛亚历山大藻对两种贝排亚硝酸氮、排磷、排氨氮的影响均为极显著差异(P<0.01),而对青蛤排硝态氮率的影响极显著差异(P<0.01),而对菲律宾蛤仔排硝态氮率的影响为不显著(P<0.01)。塔玛亚历山大藻对两种双壳贝类排氨率的变化趋势相对一致,而对于其它指标,如排磷、排硝酸氮、排亚硝酸氮的影响差距较大。
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