目的呼吸道病毒是引起呼吸道感染的最常见病原。本研究旨在通过检测13种常见呼吸道病毒：呼吸道合胞病毒(RSV)、鼻病毒(HRV)、腺病毒(ADV)、博卡病毒(HBOV)、人偏肺病毒(HMPV)、流感病毒A (IFVA)和B (IFVB)、副流感病毒1-4(HPIV1、HPIV2、HPIV3、HPIV4)、冠状病毒HKU1和NL63,了解其流行现状,掌握其流行特征和临床特点,为兰州地区儿童病毒性呼吸道感染的防治提供参考依据。自肠道病毒发现以来,在全世界范围内流行甚广,并在多个国家发生暴发流行,引起国内外学者的研究热潮,本研究应用实时荧光定量PCR方法检测肠道病毒(HEV),并采用针对肠道病毒5’端非翻译区设计的通用肠道分型引物对肠道病毒阳性标本进行分型分析,了解兰州地区肠道病毒感染情况和流行规律。方法1、收集2010年12月至2011年11月在兰州大学第一医院儿科因急性呼吸道感染就诊住院的患儿鼻咽抽吸物(NPA)545份。其中男童354例,女童191例,男女比例1.85：1,年龄范围20分钟至14岁。在患儿入院当日或3日内,或病情变化时使用一次性无菌吸痰管从一侧鼻孔插入7-8cm达鼻咽部,吸取鼻咽部分泌物2m1,保存在病毒运输液中,并冻存于-80℃低温冰箱。2、采用普通RT-PCR检测RSV、HRV、IFVA、IFVB、PIV3、 HMPV、 HCoV-HKU1、HCoV-NL63;采用巢式PCR (nested-PCR)检测ADV、HboV、 HPIV1、HPIV2、HPIV4。结合本地区2006年-2011年连续性研究资料,分析相关病毒流行趋势。3、应用荧光定量PCR方法检测545份鼻咽抽吸物标本中肠道病毒fHEV)、,结合相关临床资料,了解其在兰州地区的感染情况和流行规律。采用基于5’端非翻译区的肠道分型引物对阳性标本进行分型分析。结果1、本研究RSV的检出率为37.06%(202例),是最常见的呼吸道病毒,冬、春季流行,1、2月份达高峰,在3岁以下呼吸道感染患儿中的检出率最高。202例RSV阳性患儿中,肺炎为主要诊断,占92.57%,临床以咳嗽(98.02%)、发热(52.97%)、喘息(50%)为主要症状。痰细菌培养结果表明,细菌病毒混合感染率为45%,其中最常见的细菌有：大肠埃希菌、肺炎链球菌、肺炎克雷白杆菌、流感嗜血杆菌、副流感嗜血杆菌。兰州地区连续五个研究年度病毒检测显示,RSV检出率为19.45%-41.50%,检出高峰季节在冬春季,3岁以下年幼儿感染率明显高于其他年龄组,男女检出率无差别,肺炎和毛细支气管炎为主要诊断。2、本研究中22.98%的5岁以下住院患儿感染HPIV,检出率为21.10%,其中HPIV3的检出率(10.09%)最高,居第五位,仅在5岁以下儿童中检出,高峰年龄在1岁以下,与细菌的混合感染率为52.83%。HPIV1的检出率为6.06%,各年龄段检出率差异无统计学意义(χ2=3.387,P=0.495),夏秋季有较高的检出率,10月份检出率最高,其次为8月,冬季无阳性检出,细菌病毒混合感染率为42.42%。HPIV2检出率为1.1%,6-12月为检出高峰年龄,6月份检出率最高。HPIV4的检出率为6.24%,居HPIV感染的第二位,所有呼吸道病毒之第六位,春季流行,各年龄段检出率差异无统计学意义。HPIV1、HPIV3、HPIV4与其它呼吸道病毒的混合感染率较高。大多HPIV感染患儿的临床症状基本相似,常出现咳嗽、咳痰、喘息、发热、卡他等症状,大多数HPIV1、HPIV4感染患儿有发热症状,约一半患儿CRP检测阳性。临床诊断以肺炎、支气管炎为主,四型之间无差别(P>0.05)。兰州地区2006-2011年连续五年的HPIV检测显示,HPIV3最常见,HPIV1仅在2006-2007年(2例)与本年度检出,本研究首次检出HPIV2,检出率为1.1%。3、本研究共检出.11例HEV感染患儿,检出率为2.02%,男童7例,女童4例,男女检出率差异无统计学意义(P=1.000)。本年度HEV感染呈散在分布,四季检出率无统计学差异(Fisher=6.543, P=0.056)11例阳性患儿检出3例CVA、1例PV、3例EV68、2例EV71、2例ECHO感染,均为不同程度的呼吸道感染性疾病,肺炎为主。11例HEV感染患儿中,10例患儿的鼻咽抽吸物或血清中其他病原检测阳性,仅1例CVA感染患儿为单一感染。HEV阳性患儿中,最小病毒载量为1.012×104copies/ml,最大病毒载量为1.222×109copies/ml,平均病毒载量为1.00×109copies/ml。4、兰州地区2010年12月至2011年11月545例呼吸道鼻咽抽吸物标本共检出呼吸道相关病毒检测阳性449例,检出率为82.39%(449/545),病毒检出率排在前五位的是RSV37.06%,HRV(23.67%),ADV(21.83%),HBOV(11.01%),HPIV3(10.09%),HPIV4(6.24%)。男女病毒总检出率差异无统计学意义(Χ2=0.000,P=0.995),6-36月患儿的病毒总检出率明显高于其他年龄段x2=42.991,P=0.000)。本研究全年均有较高的病毒检出率(>70%),10、11月份检出率最高,各种病毒有明显的季节性分布(HPIV2、IFVB、HKU1、NL63除外)。5、449例病毒检测阳性患儿的混合感染率为41.43%,其中以HBOV的混合感染率最高,为90%,其次为HPIV4、ADV、HPIV3、HPIV1、HRV。本年度83.74%的病毒检测阳性患儿诊断为肺炎,咳嗽(95.32%)、发热(58.8%)、喘息、(44.32%)、卡他(27.84%)为主要临床症状。本研究呼吸道病毒检测阳性患儿中,35%CRP检查提示阳性,44%的痰细菌培养结果提示合并细菌或真菌感染,其中最常见的病原体有大肠埃希菌(26.15%)、肺炎链球菌(21.03%)、副流感嗜血杆菌和肺炎克雷白杆菌各(12.82%)、流感嗜血杆菌各(8.21%%)、真菌(4.62%)；44.71%的病毒阳性患儿至少有一种呼吸道病毒血清学IgM抗体检测阳性。结论1、呼吸道病毒是兰州地区急性下呼吸道感染住院患儿的主要病原,其中RSV、HRV、ADV、HPIV在本年度最常见。2、兰州地区连续五年的病原检测表明RSV是引起儿童急性下呼吸道感染的最重要的病原,有明显的季节性,冬春季流行,严重威胁着3岁以下年幼儿的健康。3、与以往四个研究年度不同,本年度首次采用nested-PCR方法检测HPIV1、 HPIV2、HPIV4并检出HPIV2、HPIV4，HPIV1的检出率高于前四个研究年度,表明HPIV是兰州地区急性呼吸道感染患儿的重要病原。4、本研究结果显示人肠道病毒在兰州地区呼吸道感染患儿中存在,其在本地区儿童呼吸道感染性疾病中所起的作用有待于进一步研究。