【摘 要】
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食源性致病菌污染引起的食源性疾病是危害人类健康最重要的食品安全问题。目前对食源性致病菌的很多检测方法都存在操作繁琐、耗时长,灵敏度和准确性不足等局限性。建立高效便捷,满足食品原材料质控及其终产品早期快速检测需求的食源性致病菌定量检测方法,对提高检测效率,保障公共卫生及食品安全具有重要意义。本研究应用二氧化硅、磁珠通过特异高效捕获免疫微球的制备,结合分子生物学、光学成像等技术构建了产气荚膜梭菌α毒素
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食源性致病菌污染引起的食源性疾病是危害人类健康最重要的食品安全问题。目前对食源性致病菌的很多检测方法都存在操作繁琐、耗时长,灵敏度和准确性不足等局限性。建立高效便捷,满足食品原材料质控及其终产品早期快速检测需求的食源性致病菌定量检测方法,对提高检测效率,保障公共卫生及食品安全具有重要意义。本研究应用二氧化硅、磁珠通过特异高效捕获免疫微球的制备,结合分子生物学、光学成像等技术构建了产气荚膜梭菌α毒素、空肠弯曲菌定量检测技术,主要结果如下:（1）二氧化硅免疫颗粒捕获的产气荚膜梭菌α毒素可视化检测技术基于产气荚膜梭菌α毒素（CPA）的结构分析,构建其N端和C端结构域表达载体,制备了CPAC3、CPAN兔多抗血清。应用CPAC3抗体-Si O2微球、CPAN抗体-FITC结合物,基于夹心法原理建立了微球荧光抗体检测CPA的技术,基于荧光强度与毒素剂量依赖关系,建立了基于安卓系统的CPA可视化荧光图像分析及其定量化检测技术,具有良好的稳定性和较高的灵敏度（LOD=32.8 ng/m L）,食品样品的回收率为80%-108.8%,应用智能手机app的实时分析检测时间在90 min内。应用CPAC3抗体、CPAN抗体-HRP结合物,建立了天然CPA抗体检测的双抗体夹心ELISA法（DAS-ELISA）,LOD=8.2 ng/mL。（2）免疫磁珠微球捕获的空肠弯曲菌IMBs-qPCR检测技术:基于空肠弯曲菌基因组及分离株间毒力基因功能、序列及结构分析,构建了空肠弯曲菌黏附蛋白基因（pebl A）及肠铁素受体蛋白基因（cfr A）的原核表达载体,制备了外膜蛋白PEB1和Cfr A兔多抗血清;基于PEB1抗体免疫磁珠捕获,建立了免疫磁珠结合荧光定量PCR（IMBs-q PCR）检测空肠弯曲菌的技术,具有较高灵敏度（LOD=13 CFU/m L）和良好的稳定性及特异性,检测时间在9 h左右。基于Cfr A抗体包被、PEB1抗体-HRP结合物建立的DAS-ELISA法检测空肠弯曲菌,LOD=13 CFU/m L,检测时间为4.5 h左右。综上,基于SiO2、免疫磁珠材料建立的两种食源性致病菌及其毒素检测技术,在检测靶标特异性富集、灵敏性及缩短检测时间上具有较强的优势,可作为两种食源性致病菌检测的候选方法。
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