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黑木耳(Auricularia auricular)有着很长的历史,是一种营养丰富,具有药用价值的食品。随着黑木耳生物活性的深入研究,国内外黑木耳销售量逐年最高,备受人们喜爱。黑木耳多糖是黑木耳中主要活性成分,文献报道显示黑木耳多糖具有许多生物活性,如抗肿瘤,抗氧化,调节免疫力,抗衰老和抗疲劳,降血脂等活性。本课题通过超声波提取黑木耳粗多糖,脱除色素、去除蛋白质、再经过离子交换柱纯化得黑木耳多糖,对多糖的结构表征及其体外抗凝血活性的研究,优化超声波提取工艺,纯化高活性的黑木耳多糖。研究的主要结果如下：1.黑木耳粗多糖的超声波提取及优化超声波提取黑木耳粗多糖,通过单因素实验和响应面实验,SAS软件分析确定黑木耳多糖的超声波提取最佳条件。响应面方差分析中,失拟项检验分析中,p值为0.0613,相关系数(R2)为0.9537,超声波提取最优组为超声频率70.17KHz,超声水浴温度50.99℃,超声时间23.02min,液固比35.78mL/g,黑木耳多糖理论最大值为6.39%(g/g)。在此最优条件下进行验证实验,黑木耳粗多糖得率为6.32%(g/g)。2.黑木耳多糖的去除色素和脱除蛋白质黑木耳粗多糖溶液经双氧水脱去色素,透析除去小分子物质,颜色由棕黑色变成淡黄色。Sevag法、TCA法和Polyamide吸附法三种方法,去除黑木耳多糖中蛋白质。Sevag法是传统脱除蛋白质方法之一,Sevag法脱蛋白比较温和,多糖保留率最高,脱除蛋白质效果较好。三氯乙酸法其蛋白质脱除率最高,因TCA降解多糖,使得多糖保留率最低。Polyamide吸附法,蛋白质去除率较好,而多糖也被Polyamide吸附,使得多糖的保留率比Sevag法低。选取Sevag法脱蛋白,蛋白质脱除率73.31%,多糖保留率55.89%。3.黑木耳多糖纯化脱除色素、脱除蛋白质后黑木耳多糖AAP,AAP过离子交换柱DEAE SpharoseCL-6B分别用蒸馏水、0.1、0.2、0.5mol/L的氯化钠溶液阶段洗脱得四个组分分别为AAPⅠ、AAPⅡ、AAPⅢ和AAPⅣ。收集各组分,得率分别为5.21%、39.36%、22.47%和2.35%,多糖的总回收率为69.39%。4.黑木耳多糖的表征(1)黑木耳多糖定性定量实验。在定性实验,采用紫外可见全波长扫描和红外光谱。280nm左右,AAP比CAAP,吸光值明显下降,蛋白去除较好。260-280nm下,AAPⅠ和AAPⅡ没有明显的吸收峰,说明AAPⅠ和AAPⅡ几乎没有核酸和蛋白质。黑木耳多糖CAAP、 AAP、AAPⅠ和AAPⅡ,有多糖的特征吸收峰3429.09cm-1左右和2939.07cm-1左右,有着相似的红外光谱特征。在定量实验中,CAAP、AAP、AAPⅠ和AAPⅡ中总糖、蛋白质和糖醛酸测定。(2)高效凝胶渗透色谱(HPGPC)分析黑木耳多糖AAPⅠ、AAPⅡ和AAP≡a,分子量分布及测定分子量大小。AAPI有两个主要组分,其重均分子量MW分别为60.7×104和1.425×104Da。 AAP≡经过凝胶色谱分离得含有AAPⅡa和AAPⅡb两个组分,AAPⅡ其重均分子量MW分别MW为155×104和1.419×104Da。AAPⅡa均一多糖组分,其重均分子量MW为59.8×104Da。(3)高效阴离子交换色谱法(HPAEC)测定黑木耳多糖AAPⅠ、AAPⅡ和AAPⅡa的单糖组成。AAPⅠ和AAPⅡ主要含有Xy1、Man和Gal。黑木耳多糖AAPⅡ和AAPⅡa,以甘露糖为主要成分,AAPⅡa中含有糖醛酸。AAPⅡa由Fuc、Rha、Ara、GalN、Gal、Glu、Xy1、Man和GlcA组成,其摩尔百分比为0.59：0.30：1.56：1.56：1.16：6.05：22.49：56.80：10.83。5.黑木耳多糖体外抗凝血活性的研究黑木耳粗多糖CAAP (CrudeAuricularia auricular Polysaccha ride),脱色脱蛋白多糖AAP,AAPⅠ、AAPⅡ、AAPⅡa和AAPⅢ体外抗凝血活性研究,以APTT、PT、TT为指标,黑木耳多糖对TT基本无影响。AAPⅠ和AAPⅡ对APTT和PT基本没有影响。AAP对APTT和PT有显著影响。CAAP、AAPⅡ和AAPⅡa具有极显著影响。随着AAPⅡa多糖浓度升高,AAPⅡa的抗凝血活性显著性逐渐增高。CAAP、AAPⅡ和AAPⅡa可以同时激活内源凝血系统和外源凝血系统,对共同凝血途径无影响。