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目的:建立兔气管和人鼻腔黏膜纤毛上皮细胞原代培养模型,观察细胞生长分化情况,构建高速数字化显微成像系统,观察纤毛运动模式,测量纤毛摆动频率,为深入研究黏液纤毛传输系统提供方法学基础。
方法:应用组织块法在鼠尾胶原上培养兔气管和人鼻腔黏膜纤毛上皮细胞,对培养7天的标本行HE染色、MUC5AC单克隆抗体免疫组织化学染色、扫描电镜及透射电镜观察。应用倒置相差显微镜观察纤毛运动,电荷耦合器件摄像机高速采集纤毛运动数字化图像,图像数字化处理分析观测点的灰度变化,研究灰度变化与纤毛运动的关系,探讨纤毛摆动频率的计算方法。
结果:1.细胞培养7天后可以见到大量的纤毛细胞和杯状细胞,纤毛形态正常,摆动活跃;2.MUC5AC单克隆抗体免疫组织化学染色可见分化良好的纤毛细胞和杯状细胞;3.扫描电镜及透射电镜观察见纤毛细胞分化良好,成扁平状,纤毛形态正常;4.应用高速数字化显微成像系统,可以采集纤毛运动数字化图像(240/帧),纤毛运动观测点的灰度变化与纤毛运动密切相关5.通过软件控制实现了纤毛摆动频率的逐周期、自动化测量,并且观测点的选取影响纤毛摆动频率测量。
结论:应用组织块法进行兔气管和人鼻腔黏膜纤毛上皮的体外培养,可以得到分化良好的纤毛细胞和杯状细胞;应用高速数字化显微成像系统能够采集和分析纤毛运动数字化图像,实现纤毛摆动频率逐周期、自动化测量,有助于对呼吸道黏液纤毛传输系统进行深入研究。