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目的:乳腺癌作为一种恶性肿瘤已跃居全球女性发病率排行之榜首，严重危害女性的身心健康和生命。常规的手术、放化疗及抗癌药物的治“表”手段并不能很好的解决复发和远处转移的难题，这就使得基因治疗作为一种新兴的技术倍受关注，将之运用于乳腺癌的研究中，成绩也日渐突显。TTP(trisetetraprolin)是锌指蛋白的一种，具有依赖锌离子存在的自我高度螺旋成手指状的立体结构域。从TTP基因敲除小鼠的动物模型的研究中发现，TTP是与免疫反应、炎症和造血相关联的[1]。有研究显示，TTP在一些肿瘤中的表达是降低的[2]，本实验拟探讨TTP基因过表达对乳腺癌的影响。
方法:
1.选择构建好的质粒PCR3.1和质粒PCR3.1+mTTP稳定转染乳腺癌腺癌4T1细胞系，通过镜下观察和细胞迁移实验来检测转染后细胞系的生物学性状，并用实时定量PCR的方法检测TTP的表达情况
2.将4T1细胞、稳定转染PCR3.1的4T1细胞和稳定转染PCR3.1+mTTP的4T1细胞用流式细胞技术检测细胞凋亡情况、免疫印迹法检测mTTP蛋白表达、MTT法检测细胞增殖情况。
3.建立荷瘤小鼠动物模型，观察肿瘤大小变化和肺转移灶、用实时定量PCR检测mCXCR4和mCXCR7的表达、流式细胞技术检测外周血PBMC中Th17和Th1亚群。
结果:
1.用质粒PCR3.1和PCR3.1+mTTP稳定转染4T1细胞系，实时定量PCR检测mTTP的表达情况，4T1细胞转染PCR3.1+mTTP之后，mTTP的表达明显增高，细胞形态并未发生改变，可以进行后续细胞生物学方面的研究。
2.流式细胞技术检测4T1，4T1(PCR3.1)和4T1(PCR3.1+mTTP)三种细胞的凋亡状况，结果表明三种细胞系凋亡无显著性差异，加入促凋亡药Staurosporine培养6小时后再次检测细胞凋亡，测得4T1(PCR3.1+mTTP)细胞凋亡增加，凋亡率为29.5％，而4T1，4T1(PCR3.1)细胞的凋亡率为17％和18％。
3.在4T1，4T1(PCR3.1)和4T1(PCR3.1+mTTP)三组细胞进行了细胞划痕试验，三种细胞系的细胞迁移能力并无明显差异。使用MTT法检测三种细胞增殖的能力，结果发现转染mTTP的细胞可以降低乳腺癌细胞的增殖能力。
4.在荷瘤小鼠动物模型中，发现转染mTTP的乳腺癌细胞接种小鼠后肿瘤的大小和未转染mTTP的细胞相比，明显减小，并且肺转移灶减少，说明mTTP可以影响小鼠乳腺癌的大小和转移。
5.用实时定量PCR检测4T1肿瘤组织与正常乳腺组织中的mCXCR4&mCXCR7的表达情况，发现在肿瘤组织中mCXCR4&mCXCR7的表达明显增高。mTTP转染的4T1细胞使得mCXCR4的表达升高而mCXCR7的表达降低。
6.流式细胞技术检测外周血PBMC的Th1和Th17亚群。接种4T1(PCR3.1+mTTP)细胞后的外周血Th17数量增加，Th1则无明显变化。
结论:
1.成功构建了稳定携带mTTP的小鼠乳腺癌细胞系4T1;
2.TTP可以抑制4T1细胞的增殖;
3.TTP可以提高促凋亡剂诱导4T1细胞发生凋亡的效率;
4.TTP可以抑制4T1荷瘤小鼠肿瘤的生长与转移;
5.TTP可以增加4T1荷瘤小鼠外周血PBMC中Th17的数量。