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目的:
研究酸浆醇提物(Ethanol Extracts of Physalis alkekengi Linn.,EPL)对食管癌细胞株EC-1.71的增殖抑制作用,并探讨了其抑制EC-1.71细胞增殖的作用机制,为开发抗肿瘤中药提供实验依据和理论基础。
方法:
1.采用醇提法制备酸浆溶液;
2.体外培养EC-1.71细胞,用不同浓度的EPL作用该细胞;通过细胞计数法探讨了不同浓度的EPL对EC-1.71细胞的生长抑制作用;通过倒置显微镜观察EPL对EC-1.71细胞形态的影响;通过流式细胞仪检测法分析相同浓度EPL在不同作用时间对EC-1.71细胞周期的影响;
3.采用流式细胞仪检测了EPL诱导EC-1.71细胞凋亡的凋亡率;通过JC-1染色流式细胞仪检测了EPL对EC-1.71细胞线粒体膜电位的变化;通过RT-PCR法检测了EPL作用后EC-1.71细胞中caspase-9mRNA表达量的变化;通过Western blot检测了EPL作用后EC-1.71细胞中PARP蛋白表达量的变化。
结果:
1.EPL作用EC-1.71细胞后,倒置显微镜下可观察到,细胞形态学发生变化,加药组细胞数明显减少,细胞皱缩、变圆、与邻近细胞分离,多为单个分布,其中部分细胞脱离培养板而漂浮在培养液中。
2.细胞计数结果显示,不同浓度EPL作用EC-1.71细胞后,细胞的增殖均受到抑制,并且其抑制作用呈时间和浓度的依赖性。
3.流式细胞仪检测结果显示,与对照组相比EPL处理后的EC-1.71细胞,S期细胞所占比例明显增加(P<0.05),表明EPL可使EC-1.71细胞细胞周期阻滞于S期,从而抑制EC-1.71细胞增殖。
4.EPL作用EC-1.71细胞后,细胞线粒体膜电位明显下降;细胞中caspase-9 mRNA表达水平明显增高;细胞中PARP蛋白发生裂解。
结论:
EPL能明显抑制EC-1.71细胞的增殖,诱导该细胞凋亡是其抑制机制之一,并且主要是通过线粒体凋亡途径而实现的。