鸭病毒性肝炎(Duck viral hepatitis, DVH)是由鸭肝炎病毒(Duck hepatitis virus, DHV)引起的以快速传播为特点的急性致死性传染病,主要引起3周龄内的雏鸭发病和死亡。该病病程短,死亡率高;临床表现主要为角弓反张；病理变化以肝脏的肿大、坏死、出血为主要特征。在我国同时存在1型鸭肝炎病毒(DHV-1)和新型鸭肝炎病毒(N-DHV)的流行。鸭肝炎病毒的VP1蛋白是诱导中和抗体及激发保护性免疫应答的主要抗原蛋白。本试验首先尝试利用原核表达系统表达DHV VP1蛋白,但由于基因结构问题全长基因不能成功表达,切去5端135个碱基后,构建表达质粒pET32a-VP1, DHV-1VP1基因在大肠杆菌中成功表达大小为41KD左右的重组蛋白,但Western-blot检测和ELISA试验证明表达的目的蛋白不能与相应的特异性抗血清发生反应,说明在VP1基因序列可能没能在原核表达系统中有效表达。而N-DHV VP1基因不能在大肠杆菌中表达。使用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统对VP1基因进行了克隆与表达。针对DHV-1和N-DHV的VP1基因设计两对特异性引物,使用RT-PCR方法扩增得到DHV-1YB3株和N-DHV GD株的VP1基因,将目的基因分别克隆至转移载体pFastBac HTA上,构建重组转移载体pFastBac HTA-YB3-VP1和pFastBac HTA-GD-VP1,再将重组质粒转化到DH10Bac细胞中,获得重组穿梭载体Bacmid-YB3-VP1和Bacmid-GD-VP1,转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒vBac-YB3和vBac-GD。将重组杆状病毒进行扩增繁殖,获得第三代的重组病毒,使其在昆虫细胞中表达外源蛋白,并对其条件进行优化。结果表明,在SDS-PAGE蛋白胶上有大小约为30KD左右的特异性蛋白条带,且Western-blot检测和ELISA试验证明表达的重组蛋白与相应的抗血清具有良好的反应性,且二个血清型之间无交叉反应。本研究为今后利用重组蛋白建立血清学诊断方法和亚单位疫苗的研制奠定了基础。